血浆吲哚类物质的高效液相色谱-荧光检测方法学研究及临床应用

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:voodoochildzm
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目的:1.建立一种简单、灵敏、准确的高效液相色谱-荧光检测(High performance liquid chromatography with fluorescence detection,HPLC-FLD)方法同时测定血浆中五种吲哚类物质,包括硫酸吲哚酚(Indoxyl sulfate,3-INDS)、吲哚乙酸(Indole-3-acetic acid,IAA)、吲哚丙酸(Indole-3-propionate,IPA)、吲哚(Indole,IND)以及3-甲基吲哚(3-Methylindole,3-MI)。2.用建立的方法测定多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)患者与对照组女性血浆中吲哚类物质的含量,探索血浆吲哚类物质在PCOS中的作用。方法:1.血浆样本经液液萃取处理后,采用HPLC-FLD法检测血浆中的吲哚类物质。待测物经Shim-Pack VP-ODS柱(4.6 mm×150 mm,4.6μm)进行分离。流动相条件为10 mmol/L磷酸二氢钠溶液:甲醇(40/60,v/v);柱温为35°C;流速为0.8 m L/min;激发波长(lex)和发射波长(lem)分别为280 nm和355 nm;进样体积为50μL。2.用所建立的方法测定PCOS组与对照组血浆中吲哚类物质的含量,采用相关性分析以及非参数检验等统计学方法,结合临床糖代谢指标以及抑郁测评结果分析血浆吲哚类物质在PCOS中的作用。结果:1.血浆中3-INDS的线性范围为1.56~400.00μmol/L,IAA线性范围为312.50~10000.00 nmol/L,IPA线性范围为125.00~6000.00nmol/L,IND线性范围为6.25~400.00 nmol/L,3-MI线性范围为1.56~400.00 nmol/L。该方法的日内精密度的变异均≤4.0%,日间精密度的变异均≤5.2%,平均回收率在90.1%~109.3%之间。2.与对照组相比,PCOS患者血浆3-INDS、IAA以及IND含量显著升高。3-INDS,IAA,IND与空腹血糖,空腹胰岛素和胰岛素抵抗的稳态模型评估(Homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)等糖代谢参数显著正相关;3-MI水平与空腹血糖正相关;3-INDS、IAA、IND和3-MI与胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)负相关。3-INDS(OR=1.208,95%CI:1.100~1.327,p=0.000),IAA(OR=1.437,95%CI:1.095~1.885,p=0.009)和IND(OR=1.051,95%CI:1.023~1.080,p=0.000)是PCOS发生的危险因素。3.PCOS患者抑郁组血浆中IND浓度显著高于非抑郁组(p<0.05),血浆IND(OR=1.144,95%CI为1.028~1.272,p=0.014)是PCOS患者抑郁的危险因素,且对PCOS患者抑郁有较高的诊断效能,受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线下面积(Area under the curve,AUC)为0.873,Cut-off值为53.64 nmol/L(Youden index=0.623,Sensitivity=90.9%,Specificity=71.4%)。结论:1.本研究建立了一种HPLC-FLD法同时检测血浆中五种吲哚类物质。该方法简单、灵敏、准确,适用于临床和科研。2.吲哚类物质与PCOS糖代谢有关。3-INDS、IAA和IND是PCOS发生的危险因素。IND是PCOS抑郁发生的危险因素。
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