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背景和目的：近年来，大量细胞学和病毒学研究报道证实多种疾病与人乳头瘤病毒(HPV)感染密切相关。在应用免疫抑制剂的病人或免疫低下的患者，HPV感染机率增高，且有些患者皮损可自行消退(疣，癌前期病变)，提示免疫系统在HPV感染性疾病发生、发展过程中起重要作用。免疫干预治疗将成为HPV治疗的重要手段，DNA疫苗为治疗各种HPV相关感染和肿瘤提供了有力武器，E6、E7蛋白是HPV16治疗性疫苗重要靶抗原。然而DNA疫苗的安全性和免疫效率低是困扰其临床广泛应用的最大障碍。本研究从基因突变和与单纯疱疹病毒(HSV-1)VP22基因融合2个角度构建2种DNA疫苗，并对其免疫原性进行评价。 方法：(1) 载体构建：采用PCR方法突变HPV16E7锌指结合区第58和91位氨基酸。设计含有突变位点的2对引物，采用4次PCR，扩增出含有2个突变位点的片断，将原序列中CYS(半胱氨酸)突变为GLY(甘氨酸)，插入到真核表达载体pcDNA3.1，构建突变型表达载体pcDNA-16ME7。同时将野生型E7片断插入pcDNA3.1，构建pcDNA-16E7，作为对照。另外，PCR扩增VP22序列，插入pcDNA-16E7，构建pcDNA-VP22／E7表达载体。(2) 真核细胞表达：将上述载体进行纯化定量后，用脂质体Lipofectamine 2000进行基因转染，在转染后24和48小时进行免疫荧光检测，笋提取细胞蛋白质进行12％SDS-PAGE，转膜后进行western blot分析。(3) 免疫原性分析：为评价三种载体的免疫原性，采用6-8周龄雌性C57BL／6小鼠进行了免疫原性分析，共分4组，pcDNA3.1，pcDNA-16E7，pcDNA-16ME7，pcDNA-VP22／E7，将纯化质粒制成1μg／μl，接种小鼠后腿肌肉内，每组6只，每2周1次，共注射4次，在最后一次注射后3