目的:探讨CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节型T细胞（CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Tregs）和HO^-1在EAE病程中的相关性,以及依达拉奉对EAE的保护作用,进一步确立依达拉奉对MS的治疗效应。方法:本研究采用脊髓/盐水（W/V）=1:10的小剂量豚鼠全脊髓匀浆（GPSCH）/完全福氏佐剂（CFA）的方法免疫Wistar大鼠制备EAE模型,应用依达拉奉注射液进行干预。将171只雌性Wistar大鼠随机分为对照组、EAE组和依达拉奉组三个组。依达拉奉组免疫方法与EAE组相同,于免疫当天起给予依达拉奉注射液10 mg·kg^-1·d^-1腹部内注射至处死,对照组用生理盐水/CFA免疫动物。EAE组和对照组每天给予生理盐水1ml/大鼠腹腔内注射作为对照。观察药物对EAE大鼠发病的影响,参照通用的临床评分标准对大鼠进行神经功能评分。于免疫后第10天各组随机取材,记为发病前组,并取发病3天和发病7天的大鼠,记为3天组（高峰期）和7天组（缓解期）。取大鼠脊髓腰膨大部位的组织进行HE染色观察炎症情况,同时进行免疫组织化学染色,观察Foxp3和HO^-1阳性细胞的分布并计数。用实时定量PCR法测定大鼠脊髓腰膨大组织和胸腺组织中Foxp3和HO^-1mRNA的含量。取大鼠尾静脉血,用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中的IL^-10和TGF-β的浓度值。采用SPSS13.0统计软件进行统计分析,发病率用百分数表示,组间比较采用卡方检验,计量资料以均数±标准差（±S）表示,多组计量资料均数的比较应用ANOVA方差分析,组间两两比较采用LSD法,相关性检验采用Linear Correlation,P<0.05差异有统计学意义。结果:1动物发病情况的观察:依达拉奉组平均起病时间为（17.33±2.09）天,较EAE组显著延迟;发病率为46.8%,显著低于EAE组（80.4%）,神经功能评分显著低于EAE组,以上差异均具有统计学意义（P<0.05）。2组织病理学改变（脊髓腰膨大部位）:（1）发病前EAE组可见散在炎性细胞浸润,依达拉奉组没有炎性细胞浸润。（2）发病后第3天EAE组可见炎性细胞弥漫性浸润和大量“血管袖套”形成,依达拉奉组“血管袖套”形成较少,炎性细胞主要集中于小血管周围。（3）发病后第7天EAE组炎性细胞和“血管袖套”减少,依达拉奉组炎性细胞更少,“血管袖套”消失。（4）空白对照组各时期均没有炎性细胞浸润和“血管袖套”形成。3脊髓Foxp3和HO-1的表达:Foxp3在炎性细胞上呈阳性表达,HO-1在神经元、胶质细胞和炎性细胞上均有阳性表达,本研究主要计数和比较表达Foxp3、HO-1的炎性细胞。（1）空白对照组两种因子不同时期的表达没有统计学差异（P>0.05）。（2）发病前EAE组Foxp3免疫阳性细胞平均数目为（20.57±3.31）,HO-1平均数目为（19.28±3.56）;依达拉奉组Foxp3免疫阳性细胞平均数目为（26.78±4.02）,HO-1平均数目为（29.26±3.86）,两者均显著高于EAE组;两组均显著高于空白对照组,以上差异均具有统计学意义（P<0.05）。（3）发病后第3天EAE组Foxp3免疫阳性细胞平均数目为（23.60±2.78）,HO-1平均数目为（37.03±3.68）;依达拉奉组Foxp3免疫阳性细胞平均数目为（44.05±2.68）,HO-1平均数目为（50.50±3.67）,均显著高于EAE组;两组两种因子的免疫阳性细胞的平均数目均较发病前显著增加;且均显著高于空白对照组,以上差异均具有统计学意义（P<0.05）。（4）发病后第7天EAE组Foxp3免疫阳性细胞平均数目为（27.86±2.88）,HO-1平均数目为（41.73±4.41）,均较发病后第3天显著增加;依达拉奉组Foxp3免疫阳性细胞平均数目为（33.36±3.19）,HO-1平均数目为（45.82±3.71）,均较发病后第3天明显减少;依达拉奉组显著高于EAE组,两组均显著高于空白对照组,以上差异均具有统计学意义（P<0.05）。4脊髓和胸腺中Foxp3和HO-1 mRNA的含量:4.1脊髓:（1）发病前EAE组Foxp3的平均RQ值为（0.213±0.060）, HO-1的平均RQ值为（0.346±0.020）;依达拉奉组Foxp3的平均RQ值为（1.142±0.027）,HO-1的平均RQ值为（1.353±0.034）,均显著高于EAE组;两组两种因子的平均RQ值均显著高于空白对照组,以上差异均具有统计学意义（P<0.05）。（2）发病后第3天EAE组Foxp3的平均RQ值为（1.058±0.031）,HO-1的平均RQ值为（1.446±0.025）,两者均较发病前显著增加;依达拉奉组Foxp3的平均RQ值为（3.650±0.031）,HO-1的平均RQ值为（4.444±0.024）,均显著高于EAE组,且均较发病前显著增加;两组两种因子的平均RQ值均显著高于空白对照组,以上差异均具有统计学意义（P<0.05）。（3）发病后第7天EAE组Foxp3的平均RQ值为（2.894±0.068）,HO-1的平均RQ值为（3.058±0.031）,两者均较发病后第3天显著增加;依达拉奉组Foxp3的平均RQ值为（3.585±0.053）,HO-1的平均RQ值为（3.861±0.020）,两者均较发病后第3天显著减少,且两者均显著高于EAE组;两组两种因子的平均RQ值均显著高于空白对照组,以上差异均具有统计学意义（P<0.05）。（4）空白对照组两种因子各时期的平均RQ值均没有统计学差异（P>0.05）。4.2胸腺:（1）发病前EAE组Foxp3的平均RQ值为（1.853±0.030）,HO-1的平均RQ值为（0.551±0.035）,均显著小于对照组的平均RQ值;依达拉奉组Foxp3的平均RQ值为（3.451±0.027）,HO-1的平均RQ值为（0.957±0.021）,均显著大于EAE组和空白对照组,以上差异均具有统计学意义（P<0.05）。（2）发病后第3天EAE组Foxp3的平均RQ值为（3.553±0.029）,HO-1的平均RQ值为（1.556±0.025）;依达拉奉组Foxp3的平均RQ值为（4.446±0.024）,HO-1的平均RQ值为（2.165±0.021）,均显著高于EAE组;两组两种因子的平均RQ值均显著大于空白对照组,且均较发病前显著增加,以上差异均具有统计学意义（P<0.05）。（3）发病后第7天EAE组Foxp3的平均RQ值为（1.856±0.021）,HO-1的平均RQ值为（0.545±0.024）,均显著小于同时期空白对照组的平均RQ值;依达拉奉组Foxp3的平均RQ值为（4.348±0.035）,HO-1的平均RQ值为（1.255±0.025）,均显著高于空白对照组和EAE组;两组两种因子的平均RQ值均较发病后第3天显著减少,差异均具有统计学意义（P<0.05）。（4）空白对照组两因子各时期的平均RQ值没有统计学差异（P>0.05）。5相关性检验:在同组同时期内脊髓中Foxp3和HO-1的免疫阳性细胞数目以及脊髓和胸腺中Foxp3和HO-1 mRNA的含量呈正相关（P<0.05,r>0）。6外周血IL-10和TGF-β的浓度（1）发病前EAE组IL-10的平均浓度为（17.72±0.23）,TGF-β的平均浓度为（80.64±0.21）,均显著低于空白对照组;依达拉奉组IL-10的平均浓度为（19.39±0.21）,TGF-β的平均浓度为（86.59±0.21）,均显著高于EAE组和空白对照组;以上差异均有统计学意义（P<0.05）。（2）发病后第3天EAE组IL-10的平均浓度为（20.39±0.28）,TGF-β的平均浓度为（86.52±0.26）;依达拉奉组IL-10的平均浓度为（21.43±0.27）,TGF-β的平均浓度为（88.42±0.33）,均显著高于EAE组;两组两种因子均显著高于空白对照组,且均较发病前显著增加;以上差异均有统计学意义（P<0.05）。（3）发病后第7天EAE组IL-10的平均浓度为（17.40±0.24）,TGF-β的平均浓度为（80.77±0.19）,均显著低于同时期空白对照组;依达拉奉组IL-10的平均浓度为（20.45±0.36）,TGF-β的平均浓度为（87.42±0.29）,均显著高于同时期空白对照组和EAE组;两组两种因子的平均浓度均较发病后第3天显著减少;以上差异均有统计学意义（P<0.05）。（4）空白对照组两种因子各时期的平均浓度没有统计学差异（P>0.05）。结论:1依达拉奉可以延迟EAE的起病时间,降低发病率,减轻神经功能损伤的程度。2 EAE组大鼠脊髓中Foxp3和HO-1的免疫阳性细胞数目和mRNA含量随病程逐渐递增,提示两种因子随病程变化而上调发挥免疫调节和抗氧化作用;依达拉奉治疗后,两种因子在同时期表达及mRNA含量均较EAE组增高,说明依达拉奉能促进Foxp3和HO-1的表达和更新,对疾病具有治疗作用。3 EAE大鼠胸腺中Foxp3和HO-1的mRNA含量在病程高峰期升高,发病前期和恢复期均低于正常,提示胸腺产生的CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Tregs（nTregs）和HO-1更新减低导致免疫调节和抗氧化能力下降可能是EAE发生和复发的重要因素。依达拉奉治疗后两因子mRNA含量较同时期EAE组显著增加并高于空白对照组,提示依达拉奉能促进nTregs和HO-1的更新,对疾病具有治疗作用。4脊髓中Foxp3和HO-1的免疫阳性细胞数目以及脊髓和胸腺中Foxp3和HO-1的mRNA含量具有正相关性,提示EAE病程中HO-1的变化主要与表达HO-1的CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Tregs随疾病进展而发生变化有关,HO-1与Foxp3具有协同调节免疫的作用。依达拉奉可能是通过促进HO-1的表达上调促进CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Tregs的发育和功能,从而发挥调节免疫的作用。5随疾病进展,CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Tregs的效应因子IL-10和TGF-β在EAE大鼠外周血中的浓度呈先升高后下降趋势;依达拉奉治疗后同时期两种因子浓度均升高,说明依达拉奉能促进CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Tregs通过细胞因子途径发挥免疫调节作用。