白介素-35促进牙髓干细胞骨向分化的体外实验研究

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目的:慢性炎症、肿瘤、先天性缺陷等多种原因都可以造成骨缺损,继而给患者带来容貌异常及运动受限等影响,但在现阶段,全球范围内仍然缺乏一种公认的临床治疗方法为存在骨缺损的患者解决供体骨不足的问题并提供骨组织。牙髓干细胞(Dental Pulp Stem Cells,DPSCs)因为其具有在实验室条件下少量取材即可大量扩增的能力、稳定的骨向分化能力及其非创伤性的获得方法等优势,近些年被认为有望为基于干细胞的骨修复治疗提供可能。白介素-35(Interleukin-35)是一种最新发现的具有抗炎作用的细胞因子,在T细胞介导的炎症反应中发挥重要调节作用,其在骨代谢活动及骨疾病发生发展中的影响也逐渐被发现。在本研究中,通过使用人重组白介素-35处理人牙髓干细胞骨向分化的过程,旨在探索白介素-35对该分化过程的影响。研究方法:以酶解消化法处理三位正畸患者的第三磨牙牙髓,分离培养其中牙髓干细胞,培养至P3代后分别在成骨、成脂、成神经条件培养基中培养鉴定后,进行成骨诱导21天,RT-qPCR检测成骨相关基因(Runx2,COL-1)以及IL-35受体(gp130)表达情况,茜素红染色鉴定矿化结节,用氯化十六烷基吡啶溶液定量分析矿化结节生成情况;用浓度为100ng/ml的IL-35刺激牙髓干细胞的骨向分化,分别在有/无IL-35的情况下,比较成骨相关基因表达及茜素红染色定量分析结果。结果:茜素红染色结果及成骨相关基因表达证明了牙髓干细胞的骨向分化(P<0.05),分化过程伴有gp130(IL-35受体之一)的表达升高(P<0.05)。牙髓干细胞在人重组IL-35作用下,显示出更强的茜素红染色(P<0.001)、并伴有成骨相关基因表达升高(P<0.05)。结论:白介素-35具有促进牙髓干细胞骨向分化的能力。
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