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研究背景和意义：结直肠癌是男性第三位、女性第二位高发的肿瘤。化疗是抗癌治疗的重要手段。奥沙利铂属含1,2二氨环己烷(DACH)的铂类药物,广泛用于治疗对顺铂耐药的肿瘤。在欧洲,奥沙利铂已被准许作为一线药物治疗结直肠癌。在目前结肠癌的化疗过程中,尽管靶向抗癌治疗的发展已经取得了长足进步,对奥沙利铂耐药趋势日益增加,化疗药物耐药现象的出现是抗肿瘤治疗的主要瓶颈。寻找有效对抗奥沙利铂耐药的方案已成为目前结肠癌治疗的关键问题之一已研究资料表明,针对化疗耐药的靶向治疗有望成为提高疗效的重要策略。基于此原因,本研究建立了奥沙利铂耐药结肠癌S174T/L-OHP细胞系,运用该细胞系开展体外实验,可以简化并很好的模拟结肠癌对奥沙利铂耐药的发展。利用此细胞系深入研究耐药的分子机制,可能有助于发展有效治疗方式,将耐药肿瘤细胞逆转为对化疗敏感的细胞。进而发展新型靶向治疗,攻克肿瘤细胞对化疗耐药的问题,这也正是目前结肠癌治疗的一个热点。CD147是一个高度糖基化的蛋白,属免疫球蛋白超家族成员,在细胞间识别中起着关键的作用。最近研究结果指出,CD147可能对肿瘤细胞生物学行为起着重要的调控作用,其中CD147对化疗耐药的影响提示其可能参与调节化疗耐药的机制。CD147可能成为现今肿瘤治疗的潜在治疗靶点。MicroRNAs(简称：miRNAs)是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码RNA小分子。大量研究数据表明miRNAs表观遗传修饰调节基因表达,所调控的基因涉及许多重要的细胞生物学行为,如细胞增殖、凋亡、分化、迁移等,提示它们可能在肿瘤发展中扮演致瘤或抑瘤的角色.研究显示,结肠癌细胞中miR-492可抑制细胞的增殖和侵袭能力,提示miR-492对结肠癌细胞生长起着至关重要的作用。基于这些研究,我们推测miR-492可能通过调控CD147表达,在结肠癌细胞化疗耐药过程中扮演重要角色。本研究通过开展体内外细胞生长实验,旨在阐明miR-492/CD 147轴在结肠癌细胞奥沙利铂耐药中的关键功能调控作用。研究结果提示miR-492通过调节CD147,促进结肠癌对奥沙利铂的耐药。CD147可能成为对抗结肠癌奥沙利铂耐药的一个新型治疗靶点。方法：1.建立LS174T/L-OHP寸药细胞系本实验所采用的方法是逐步递增培养液中L-OHP浓度、间歇作用于LS174T结肠癌细胞,对其进行体外诱导筛选而获得。应用MTT法分别检测倍比稀释浓度的L-OHP对其细胞的抑制率,进而确认所建立细胞系具有良好的耐药性和稳定性。2.分析Mi R-492/CD147在结肠癌细胞LS174T及耐药细胞LS 174T/L-OHP中的表达实时PCR分析LS 174T/L-OHP和LS174T细胞内miR-492和CD147的mRNA表达水平。Western blot检测LS 174T/L-OHP和LS174T细胞中CD147的表达水平。揭示miR-492/CD147可能参与结肠癌LS174T细胞对奥沙利铂耐药的过程。3.敲低LS 174T/L-OHP细胞CD147表达对LS 174T/LOHP细胞耐药性的影响RNA干扰技术敲低LS 174T/L-OHP细胞CD147表达后,MTT实验结果检测LS 174T/L-OHP细胞对奥沙利铂的耐药性的影响。4.下调LS 174T/L-OHP细胞中miR-492表达对CD147蛋白水平的影响采用miRNA抑制体转染LS 174T/L-OHP细胞的方法,下调LS 174T/L-OHP细胞中miR-492的表达对CD147蛋白水平的影响。5.上调LS 174T/L-OHP细胞中miR-492表达对CD147蛋白水平的影响转染pre-mi R-492外源性上调miR-492,检测LS174T/L-OHP细胞中CD147蛋白含量,双荧光素酶检测CD147 3’-UTR的启动子荧光素酶活性,进而MTT法检测LS 174T/L-OHP细胞对奥沙利铂的耐药性。6.体内实验用裸鼠肿瘤耐药细胞,外源性上调miR-492,检测其对CD147的调控作用,同时监测肿瘤体积来揭示miR-492/CD147对肿瘤细胞耐药性的影响。结果在本研究中,我们发现与对照组结肠癌LS174T细胞相比,奥沙利铂耐药细胞LS 174T/L-OHP中miR-492的表达水平较低,CD147的表达水平则更高。在LS 174T-L-OHP中,我们还发现敲低CD147可以增强LS 174T/L-OHP细胞对奥沙利铂的敏感性。采用miRNA抑制体转染LS 174T/L-OHP细胞的方法,下调LS 174T/L-OHP细胞中miR-492的表达,CD147表达水平升高；外源性导入pre-miR-492上调miR-492,可以下调CD147的表达水平,同时提高肿瘤细胞对奥沙利铂的敏感性。此外,给奥沙利铂耐药移植瘤注入miR-492,能够提高耐药细胞对药物的响应。结论1. LS 174T/L-OHP耐药细胞系的建立具有良好的耐药性和稳定性。2. LS 174T/L-OHP细胞中miR-492水平下调,CD147的蛋白和mRA表达水平均上调。3.CD147表达水平和LS 174T/L-OHP细胞耐药性相关,敲低LS 174T/L-OHP细胞CD147可以增强LS 174T/L-OHP细胞对奥沙利铂的敏感性。4.miR-492可以通过对CD147表达的直接调控,改变奥沙利铂耐药的结肠癌LS 174T/L-OHP细胞对奥沙利铂的敏感性。5.动物实验结果显示在结肠癌细胞中,表达外源性的miR-492,可以降低细胞对奥沙利铂的耐药性,这种作用与miR-492下调CD147表达相关。6.miR-492/CD 147对结肠癌细胞奥沙利铂耐药起着重要的作用,提示miR-492/CD 147信号通路可能是治疗耐药结肠癌的一个新靶点。