【摘 要】
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目的:神经胶质细胞瘤是起源于大脑和脊髓胶质细胞的恶性肿瘤,胶质瘤具有高度异质性和侵袭性,外科手术很难实现根治性切除,患者预后较差。因此,迫切需要阐明涉及神经胶质瘤发生发展的分子机制,以及研究用于诊断和治疗目的的新型生物标志物。前期生物信息学分析发现,高表达miR-935的胶质瘤患者生存时间明显高于低表达miR-935的患者,且WHO分级Ⅳ级胶质瘤中miR-935的表达明显低于其它级别胶质瘤。故我们
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目的:神经胶质细胞瘤是起源于大脑和脊髓胶质细胞的恶性肿瘤,胶质瘤具有高度异质性和侵袭性,外科手术很难实现根治性切除,患者预后较差。因此,迫切需要阐明涉及神经胶质瘤发生发展的分子机制,以及研究用于诊断和治疗目的的新型生物标志物。前期生物信息学分析发现,高表达miR-935的胶质瘤患者生存时间明显高于低表达miR-935的患者,且WHO分级Ⅳ级胶质瘤中miR-935的表达明显低于其它级别胶质瘤。故我们猜测miR-935在胶质瘤中表达下调,且对胶质瘤的发生发展有抑制作用。为验证这一猜想,本研究通过检测miR-935在胶质瘤组织及细胞系中的表达,分析miR-935的表达与WHO分级之间的关联性。构建miR-935过表达胶质瘤细胞模型,体内、外实验研究其对胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力及体内成瘤能力的影响。方法:收集临床胶质瘤组织及瘤旁正常组织,通过实时荧光PCR（Real-Time PCR）,检测临床患者胶质瘤组织及瘤旁正常组织中miR-935的表达水平;并比较WHO分级Ⅰ级-Ⅱ级（TⅠ-TⅡ组）及Ⅲ级-Ⅳ级（TⅢ-TⅣ组）miR-935的表达水平;选定胶质瘤细胞株（LN229、T98、U87、U251、U118、A172）及人正常星形胶质细胞株NHAS进行培养,通过RT-PCR,检测胶质瘤细胞株及人正常星形胶质细胞株NHAS中miR-935的表达水平;过表达miR-935质粒慢病毒转染人脑胶质瘤细胞株（T98、U87）,每组细胞株分为两组:第一组:过表达阴性对照组（NC）;第二组:过表达miR-935组（LV-miR-935）;通过CCK-8实验,平板克隆实验,流式细胞仪进行细胞周期分析,检测各组细胞的增殖能力;通过细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力;通过transwell侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力;通过裸鼠皮下成瘤实验检测各组细胞体内增殖的成瘤能力。结果:与瘤旁正常组织相比,胶质瘤组织中miR-935的表达明显下调（P<0.05）;与TⅠ-TⅡ组相比,TⅢ-TⅣ组miR-935明显降低（P<0.01）;与正常人星形胶质细胞（NHA）相比,胶质瘤细胞株T98、U87、U251、U118、A172、LN229中miR-935的表达明显下调（P<0.001）,其中T98及U87的表达量相对较低;miR-935过表达慢病毒转染各组细胞后,与NC组相比,各组（U87、T98）LV-miR-935组,miR-935表达量明显上调（P<0.01）;CCK-8实验,平板克隆实验,细胞周期实验中,与NC组相比,各组（U87、T98）LV-miR-935组细胞增殖能力明显受到抑制作用,差异具有统计学意义;细胞划痕实验中,与NC组相比,各组（U87、T98）LV-miR-935组细胞迁移能力明显受到抑制作用,差异具有统计学意义;Transwell小室侵袭实验中,与NC组相比,各组（U87、T98）LV-miR-935组细胞侵袭能力明显受到抑制作用,差异具有统计学意义;裸鼠皮下成瘤实验中,LV-miR-935组裸鼠瘤体终体积及终重量明显低于NC组（P<0.01）,LV-miR-935组裸鼠的体重明显高于NC组（P<0.01）。结论:生物信息学分析和RT-PCR结果表明,与瘤旁组织相比,miR-935的表达在神经胶质瘤组织中显著降低。从III和IV期患者获得的神经胶质瘤组织中miR-935的表达也显著低于I和II期患者。此外,miR-935的过表达显著降低了胶质瘤细胞的增殖,诱导了神经胶质瘤细胞的细胞周期停滞,并抑制了胶质瘤细胞迁移和侵袭。这些发现表明,miR-935可以在神经胶质瘤中起抑癌作用,而miR-935在神经胶质瘤中的表达增加可能会抑制其进展。
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