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H9N2禽流感病毒为低致病力毒株,能造成宿主的免疫抑制,并且可与其他病原微生物协同作用造成鸡群生长缓慢,产蛋量下降,给养禽业带来了巨大的经济损失。1999年以来,H9N2亚型禽流感病毒感染人事件的多次发生,其公共卫生意义引起了全世界的广泛关注。HA和NA蛋白是H9N2禽流感病毒囊膜上的两个表面糖蛋白,与宿主特异性、病毒的毒力等密切相关。HA在吸附和穿膜过程中起着关键的作用,可刺激机体产生抗体以中和病毒的感染。NA可移去细胞膜出芽点上的神经氨酸,有利于病毒的成熟与释放。本研究对3个H9N2禽流感病毒分离株的HA和NA基因进行了分子遗传变异研究,为我国H9N2禽流感的防治提供理论依据。研究内容如下:1.从陕西省关中地区发病鸡群中分离出3株H9N2 AIV,动物感染试验发现,3株毒株对雏鸡均有一定的致病性,但致死率低。2.应用RT-PCR方法对3个H9N2亚型禽流感分离株(LF、XL和WN)的HA基因进行了扩增,各扩增产物经测序后与GenBank登录的H9N2亚型禽流感参考毒株的HA基因进行核苷酸及其推导氨基酸序列分析。结果表明,3个H9N2分离株间的HA基因核苷酸同源性为99.7 %～99.9 %,推导氨基酸同源性为99.1 %～99.6 %;分离株与参考毒株HA基因核苷酸同源性为84.7%～98.9 %,推导氨基酸同源性为87.2 %～98.6 %。3个H9N2分离株间的HA基因核苷酸序列比较,共有5个位点的核苷酸发生突变,其中4个位点的核苷酸的改变导致了相应的氨基酸也发生突变。HA蛋白的7个受体结合位点比较保守,但是他们在551–553位氨基酸缺失了潜在的糖基化位点。3个H9N2分离株裂解位点氨基酸序列RSSR↓G符合低致病性禽流感的特征,但是LF裂解位点附近333位脯氨酸(Pro)突变为组氨酸(His),即非极性氨基酸向极性碱性氨基酸的转变,裂解位点的变化可能是LF株生物学特性改变的分子基础。3.应用RT-PCR方法对3个H9N2亚型禽流感分离株的NA基因进行了扩增,各扩增产物经测序后与GenBank登录的H9N2亚型禽流感参考毒株的NA基因进行核苷酸及其推导氨基酸序列分析。结果表明,3个H9N2禽流感分离株间的NA基因核苷酸同源性为99.6 %～99.8 %,推导氨基酸同源性为99.1 %～99.6 %;3个H9N2禽流感分离株与参考毒株的NA基因核苷酸同源性为87.4%～99.6%,推导氨基酸同源性为89.1%～98.9 %; 3个H9N2 AIV分离株与H9N2亚型猪源流感毒株的NA基因核苷酸同源性为88.1%～97.2%,推导氨基酸同源性为89.5%～97.0%;3个H9N2 AIV分离株与H9N2亚型人源流感毒株NA基因核苷酸及推导氨基酸同源性分别为93.6%～93.8%和93.6%～94.2%。分离NA基因核苷酸序列在185-193位缺失了9个核苷酸TAACAGAGA,导致了氨基酸序列63-65位缺失了T、E、I 3个氨基酸,而广西、福建、云南三省以及与中国邻近的韩国、巴基斯坦H9N2毒株的NA蛋白没有类似的氨基酸丢失。表明陕西省关中地区流行的H9N2 AIV和桂、滇、闽及韩国、巴基斯坦的流行株来源不同或NA基因的遗传进化程度不同。