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本研究选用生产上广泛栽培的鲜食枣品种——黄骅冬枣和辣椒枣叶片为试材,对影响其叶片再生植株的因子包括基因型,基本培养基,供试试管苗状态,接种方式,继代天数,再生代数,暗培养时间,激素种类及浓度等方面进行了探讨,建立了黄骅冬枣和辣椒枣两个品种叶片的高效再生体系,冬枣叶片再生植株的快繁体系,并进行了卡那霉素临界浓度的筛选试验。主要结果如下: 1 获得高效稳定的枣叶片再生体系 通过对MS和WPM两种基本培养基的比较,发现冬枣叶片在MS和WPM两种基本培养基中再生率差异不显著。以MS为基本培养基诱导时,叶片形成较多愈伤组织,愈伤组织分化出不定芽。在WPM基本培养基中,较少形成愈伤组织,不定芽可从叶片直接发生。激素对冬枣离体叶片再生频率影响研究发现,TDZ对冬枣叶片诱导再生率显著高于BA,TDZ与IBA结合使用诱导效果更好。通过对不同pH值条件下叶片再生率的比较,发现pH为5.8~6.4较适于冬枣叶片再生不定芽。本试验采用二步培养法,首先在附加高浓度细胞分裂素类物质的培养基中培养,适宜培养基为MS+TDZ1.0mg/L+IBA0.1~0.5mg/L。第二步,28d后转入不附加细胞分裂素类物质的培养基(即MS+IBA0.1mg/L+GA30.5mg/L)中诱导不定芽再生。运用该方法可大大提高芽点的成苗率,降低玻璃化程度,叶片再生率91.33%。 首次建立了辣椒枣离体叶片再生体系。不定芽诱导采用二步培养法。最适的辣椒枣组培苗叶片诱导培养基WPM+TDZ0.5mg/L+IBA0.1mg/L,pH值5.8~6.4,28d后转接入MS+IBA0.1mg/L+GA30.5mg/L,再生率78.89%。 2 本试验通过系统比较和筛选,发现继代培养6代以上,叶龄30~40d,植株生长健壮,没有生根的试管苗叶片再生率最高。本试验比较了试管苗叶片不同节位,叶片不同部位,叶片切伤与否以及叶片正放与反放对叶片再生能力的影响,发现用试管苗中上部叶片并将叶片切伤后正放于诱导培养基上叶片再生效果最好,不定芽多发生于叶片中部和基部。 3 通过研究暗培养对叶片再生的影响,发现叶片接入诱导培养基后先经过14d暗培养可提高叶片再生率,但叶片平均出芽数较低;而不经过暗培养的叶片平均出芽数显著增加。 4 通过在培养基中附加不同浓度的AgNO3试验比较,发现附加0.1mg/L的AgNO3可显著提高叶片不定芽的再生率。 5 获得高效的冬枣叶片再生植株快繁体系 适宜冬枣叶片再生植株茎段增殖培养的培养基为MS+BA1.0mg/L+KT0.5mg/L+IBA0.1mg/L,增殖系数3.64。在继代培养基中附加0.5mg/L的GA3可有效提高茎段的伸长效果。适宜冬枣叶片再生植株生根的培养基为1/2MS+IAA1.0mg/L,生根率达87.10% 6 冬枣叶片再生植株的移栽 本试验摸索了适宜冬枣叶片再生植株移栽的环境条件。因为北方地区空气相对湿度较低,因而在前期塑料钵过渡时,相对湿度保持在70%以上可使移栽成活率达57%。移入大田时选择降雨较多的5一7月份可提高成活率。 7研究了抗生素卡那霉素对冬枣不定芽再生及茎段生长的影响,确定了选择压。 通过在培养基中附加。、20、50、100、15Om留L的卡那霉素,观察叶片再生情况及植株成活情况,筛选出冬枣叶片分化不定芽的临界浓度为SOm叭,冬枣抗性芽筛选的临界浓度为loom叭。