Kv1.5抗血清制备及Cystatin B原核表达载体构建

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:willzhang86
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目的:制备电压门控型钾通道蛋白Kv1.5的多克隆抗体并对其进行特性鉴定。   方法:利用生物信息学方法分析大鼠的Kv1.5蛋白的序列,根据它的亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构等指标选择一段8个氨基酸序列,据此合成Kv1.5多肽片段,并将其与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联作为抗原,免疫新西兰白兔来制备Kv1.5抗血清。采用辛酸-硫酸铵法纯化抗血清,纯化后的抗血清通过ELISA和Western Blotting的方法进行鉴定。   结果:成功制备Kv1.5抗血清,该抗血清的效价为1:64000,可与Kv1.5合成肽及天然Kv1.5蛋白出现特异性反应,该抗血清识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)为59 kd;Western Blotting的结果显示,所制备的抗血清能识别大鼠心脏的Kv1.5蛋白。   结论:合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗血清,并且制备的抗血清经ELISA、Western Blotting鉴定后特异性较好。
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