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犬瘟热（Canine distemper，CD）是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus，CDV）感染犬或其它食肉目动物引起的一种高度接触传染性、致死性疾病，CDV属于副粘病毒科麻疹病毒属，该属成员还包括麻疹病毒（MV）和牛瘟病毒（RPV）。CDV是负链单股不分节段的RNA病毒，基因组全长15690nt，主要由N基因，P基因，M基因，F基因，H基因，L基因组成，只有一个血清型。本研究旨在建立一种能区分CDV强毒株、弱毒株的复合RT-nPCR的检测方法。根据GenBank上登录的所有CDV基因组全序列，选择CDV强、弱毒株间有差异区域，选择其高度保守区设计了一对通用引物P1和P4，并在该对引物跨越区域的内部设计了CDV强毒株特异性引物P2及弱毒株的特异性引物P3，用引物P1／P4进行RT-PCR，然后用引物P2／P3／P4进行复合套式PCR，建立了一种能区分CDV强、弱毒株的复合RT-nPCR的鉴别诊断方法。应用该方法从CDV强、弱毒株的基因组中分别扩增出了大小为247bp和177bp的特异性片段，从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为247bp和177bp的两条特异性片段，与犬细小病毒（CPV）、犬腺病毒（CAV）、犬冠状病毒（CCV）、狂犬病病毒（RV）、新城疫病毒（NDV）的细胞培养物，以及正常细胞对照组进行复合RT-nPCR扩增时均为阴性。该方法敏感性为可以检测到相当于1×10-1TCID50的病毒RNA。检测耗时短，最快可在6h内完成。对从黑龙江省及吉林省采集的30份疑似CD病料（分别来自于犬、狐、貉的脾脏、肝脏、肺脏、膀胱）进行了检测，结果表明，有20份为CDV，其中15份为CDV强毒株，5份为CDV弱毒株。选择2株复合RT-nPCR检测为强毒的样品（HLJ-1、HLJ-2）与GenBank中其余25株具有代表性的CDV毒株进行H基因序列分析，结果显示，复合RT-nPCR的检测结果是准确的；并且目前CDV各病毒株之间由于地域性及年代的不同，主要可区分为强毒株与弱毒株两个基因型，其中强毒株又可分为亚洲1型（Asia-1）、亚洲2型（Asia-2）、欧洲型（Europe）、美国型（USA）、北极型（Arctic）等五种基因型。我国有3株流行野毒（giant panda、TN、Guizhou）属于Asia-1型，1株流行野毒（Liu）属于Arctic型，HLJ-1、HLJ-2均属于Asia-2型。本研究建立的复合RT-nPCR可以检测CDV感染，并能作为强毒株、弱毒株的鉴别诊断方法，可用于临床快速检测，流行病学监测。