【摘 要】
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目的: 细胞水平上研究人脂肪来源的间充质干细胞(AD-MSCs,Adipose-derived mesenchymal stem cells)影响顺铂介导的上皮性卵巢癌细胞的凋亡作用及其作用机制。 材料和方法:
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目的: 细胞水平上研究人脂肪来源的间充质干细胞(AD-MSCs,Adipose-derived mesenchymal stem cells)影响顺铂介导的上皮性卵巢癌细胞的凋亡作用及其作用机制。 材料和方法: 1.原代培养AD-MSCs,留取2-3天培养基上清作为条件培养基。条件培养基培养10天后的上皮性卵巢癌细胞SKOV3和ES2作为实验组进行后续检测,常规培养基中的肿瘤细胞作为对照组。 2. MTT法检测顺铂对AD-MSCs处理前后的上皮性卵巢癌细胞SKOV3和ES2的毒性变化,计算IC50值。 3.分别用 Hoechst33342荧光染色法、Annexin V-FITC流式细胞术、Western Blotting检测经一定浓度顺铂作用48h后的卵巢癌细胞SKOV3和ES2中凋亡小体、凋亡率以及活化的caspase-3片段的表达来研究AD-MSCs对顺铂介导的上皮性卵巢癌细胞的凋亡作用。 4.原子光谱吸收法检测经AD-MSCs处理前后的上皮性卵巢癌细胞SKOV3和ES2内铂蓄积的变化。 结果: 1. MTT实验中,经AD-MSCs刺激后的上皮性卵巢癌细胞对顺铂的敏感性降低。实验组中 ES2和 SKOV3的IC50值从对照组的14.82±0.98μmo l/L和29.06±4.29μmol/L分别增加至23.70±0.97μmol/L(PES2=0.004)和49.80±4.51μmol/L(PSkov3=0.002)。 2.经顺铂作用后的实验组卵巢癌细胞中,Hoec hs t33342荧光染色法结果显示凋亡小体的形成少于对照组;Anne xin V-FITC流式细胞术中测定的ES2和SKOV3细胞凋亡率较对照组下降1.9倍(P=0.019)和2.33倍(P=0.04),且以早期凋亡为主;Western blotting结果显示caspase-3活化片段的的表达少于对照组。AD-MSCs条件培养基可以增强卵巢癌细胞对顺铂的凋亡抗性。 3.原子光谱吸收法中,经AD-MSCs刺激后的上皮性卵巢癌细胞ES2和SKOV3中铂的蓄积从对照组的94.29±19.61μg/g和111.69±23.10μg/g降至30.99±9.64μg/g和40.24±16.93μg/g(PES2=0.002,PSkov3=0.004)。 结论: AD-MSCs的旁分泌作用可以增加卵巢癌细胞的凋亡抗性,减少卵巢癌细胞内Pt的蓄积,增强顺铂耐药作用。
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