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目的:本文以治疗肺热咳喘证的芩杏清热止咳颗粒剂为研究对象,采用UPLC-LTQ-Orbitrap技术鉴定芩杏清热止咳颗粒剂化学成分及大鼠灌服后血浆中原形成分;建立主要成分的LC-MS/MS含量测定方法及主要入血成分的血药浓度测定方法。开展制剂中各药味的TLC定性鉴别,主要有效成分HPLC定量方法研究。希冀建立基于药效物质基础的复方中药质量控制方法,确保该方的内在质量,更好地服务于临床。方法:1.基于UPLC-LTQ-Orbitrap技术的芩杏清热止咳颗粒入血成分分析采用UPLC-LTQ-Orbitrap技术,通过精确分子量及多级质谱信息对芩杏清热止咳颗粒制剂成分及大鼠灌服后血浆中的原形成分进行分析和鉴定。通过检索中外文献及化学专业数据库,收集黄芩、栀子、桑叶、苦杏仁、甘草植物中报道化合物信息,最终建立一个包含565种化学成分的数据库,库中包括名称、分子式、结构式及精确分子量等信息。2.LC-MS/MS法同时测定芩杏清热止咳颗粒制剂12种有效成分的含量采用Agilent 6460 Triple Quad LC/MS,Ultimate XB-C18（4.6 mm×100 mm,3μm）色谱柱;流速0.4 m L·min-1;流动相A为0.5‰甲酸水溶液,B为乙腈,梯度洗脱。电喷雾离子源（ESI）,多重反应检测模式（MRM）。样品用50%甲醇水溶液超声提取,芍药苷及芬布芬分别为负离子、正离子扫描的内标。测定芩杏清热止咳颗粒中绿原酸、京尼平苷酸、苦杏仁苷、栀子苷、甘草苷、异甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、甘草素、异甘草素、甘草酸等12种有效成分含量。3.芩杏清热止咳颗粒多组分药代动力学的初步研究大鼠给药浓度为0.25 g·m L-1,灌胃后于不同时间点取血,含药血浆加肝素抗凝,Vitamin C抗氧化,乙腈沉淀蛋白。测定血药浓度。数据采用Win Nonlin软件分析处理。使用非房室分析模型进行药代动力学参数的计算,包括半衰期(T1/2),曲线下面积(AUC0-∞),平均驻留时间(MRT0-∞),表观分布容积（Vz）和清除率（Cl）。4.芩杏清热止咳颗粒的薄层色谱鉴别黄芩药味的薄层色谱鉴别:采用聚酰胺薄膜板,以对照品黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素为对照,甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10:3:1:2）为展开剂,置紫外光灯（365 nm）下检视。栀子药味的薄层色谱鉴别:采用硅胶HSG薄层板,以对照品栀子苷为对照,乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5:5:2:1）为展开剂,10%硫酸乙醇溶液为显色剂。桑叶药味的薄层色谱鉴别:采用硅胶HSG薄层板,以对照药材桑叶为对照,甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5:2:1）的上层溶液为展开剂,展开剂预饱和10分钟,置紫外光灯（365 nm）下检视。苦杏仁药味的薄层色谱鉴别:采用硅胶HSG薄层板,以对照品苦杏仁苷为对照,正丁醇-冰醋酸-水（4:1:5）的上层溶液为展开剂,0.8%磷钼酸的15%硫酸乙醇为显色剂。甘草药味的薄层色谱鉴别:采用1%氢氧化钠制备的硅胶HSG薄层板或荧光板,以对照品甘草酸单铵盐为对照,乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15:1:1:2）为展开剂,10%硫酸乙醇溶液为显色剂,置紫外灯下（365 nm）检视,或置254 nm下检视。5.芩杏清热止咳颗粒多组分的HPLC法测定苦杏仁苷含量测定:Ultimate XB-C18色谱柱（4.6 mm×100 mm,3μm）;流动相:乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）（8:92）。体积流量1.0 m L·min-1;检测波长:207 nm。黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量测定:Diamonsil Plus C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相0.2%磷酸水（A）-甲醇（B）,梯度洗脱,体积流量1.0 m L·min-1;检测波长274nm。栀子苷、甘草苷、异甘草苷、甘草酸含量测定:Diamonsil Plus C18色谱柱（4.6mm×250 mm,5μm）;流动相0.05%磷酸水（A）-乙腈（B）,梯度洗脱,检测波长:0～25 min,237 nm;25～33 min,360 nm;33～50 min,237 nm;体积流量1.0 m L·min-1。结果:1.基于UPLC-LTQ-Orbitrap技术的芩杏清热止咳颗粒入血成分分析建立了一种灵敏、高效的化合物鉴定方法。制剂中鉴定出130种化合物,包括黄芩苷等黄酮类、绿原酸等有机酸类、甘草酸等皂苷类成分。大鼠灌服颗粒剂后血浆中鉴定出35种原形成分。2.LC-MS/MS法同时测定芩杏清热止咳颗粒制剂12种有效成分的含量建立了LC-MS/MS法同时测定芩杏清热止咳颗粒制剂中绿原酸、京尼平苷酸、苦杏仁苷、栀子苷、甘草苷、异甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、甘草素、异甘草素、甘草酸等12种有效成分的含量。经系统方法学验证,所建立的分析方法稳定、快速、准确。3.芩杏清热止咳颗粒多组分药代动力学的初步研究建立了快速、灵敏的LC-MS/MS方法检测大鼠血浆中栀子苷、甘草苷、异甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、甘草素、异甘草素和甘草次酸9种成分,该方法无明显的基质效应,线性关系、精密度、准确度、稳定性等满足生物样本定量检测要求。并成功用于大鼠灌胃给药后这些成分的药代动力学研究。黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、甘草素和异甘草素药时曲线图中均可观测到双峰吸收,栀子苷和甘草苷、异甘草苷能快速吸收入血。4.芩杏清热止咳颗粒的薄层色谱鉴别所建立的方法斑点清晰完整,阴性样品无干扰,可用于本制剂中各药味的鉴别。5.芩杏清热止咳颗粒多组分的HPLC法测定苦杏仁苷含量在2.112～2.241 mg·g-1;黄芩苷含量在39.35～45.38 mg·g-1,汉黄芩苷在4.137～5.135 mg·g-1,黄芩素在0.6247～0.8632 mg·g-1,汉黄芩素在0.3159～0.4038 mg·g-1;栀子苷含量测定在10.93～12.25 mg·g-1,甘草苷在1.150～1.362 mg·g-1,异甘草苷在0.9970～1.156 mg·g-1,甘草酸在3.388～4.158mg·g-1。所建立的方法经系统方法学验证,准确可靠,重复性好,可用于芩杏清热止咳颗粒的质量控制。结论:UPLC-LTQ-Orbitrap技术能简便、快速、高通量分离鉴定制剂成分及大鼠血浆中的原形成分;建立的LC-MS/MS法测定制剂中多组分及血药浓度,方法灵敏。薄层色谱斑点清晰完整,可用于鉴别本制剂中的各药味。多组分的HPLC法测定有助于实现该制剂质量的有效控制。