背景和目的:人白蛋白(human albumin,HA)是人体内浓度最高的血浆蛋白,血浆中浓度为35-55g/L,占总血浆蛋白的50%以上。HA仅在肝脏中合成,正常人以12-25g/d的速率合成。多项研究表明体液中的HA含量的变化与多种疾病(如糖尿病、肾病、和肝损伤)的发生、发展密切相关。因此,精确检测体液中白蛋白含量在临床诊断和生物医学研究中意义重大。本论文以HA为靶标分子,通过筛选获得HA特异性荧光探针底物1,3-二氯-7-羟基-9,9-二甲基-2(9H)-吖啶酮甲基联苯甲酸酯(DDABP),并建立相应的荧光分析方法,以用于复杂体系中白蛋白的快速检测。筛选的新型探针分子DDABP及相应的分析方法为探索白蛋白分子的体内功能、代谢规律及在相关疾病中的作用提供参考。方法:1.利用荧光分析和紫外分光光度法考察探针与白蛋白反应的光谱变化。2.通过表型筛选实验考查探针的选择性,测量定量下限值评估探针的灵敏性,小分子离子干扰实验考察探针的生物稳定性。3.基于液相质谱的蛋白质组学方法考察探针的识别机理。4.利用探针构建的荧光分析方法检测细胞上清和人血浆中白蛋白,并与其它方法比较。5.应用荧光成像技术,可视化分析肾细胞摄取白蛋白的生物学过程。结果:1.探针DDABP被白蛋白代谢后,在662nm处有显著的荧光信号产生,同时反应体系的紫外吸收光谱也发生相应的变化。2.探针DDABP具有非常好的选择性,仅能被人白蛋白水解,而其他血浆水解酶和蛋白分子不会引起荧光信号产生;并且该探针具有极高的灵敏性,检测下限为6.51mg/L;该探针抗干扰能力强,不受内源性氨基酸和金属离子影响。3.探针DDABP的检测是基于白蛋白的假酯酶活性,探针被白蛋白水解后,酯键断开,醇基部分游离出来,羧酸部分通过共价结合到白蛋白分子的赖氨酸残基上。4.探针DDABP可以测量肝细胞分泌的微量白蛋白,且所测结果与液相质谱蛋白质组学非常接近;同时新方法测得血浆中白蛋白浓度也与临床BCG方法高度一致。5.探针DDABP可以被细胞摄取的白蛋白水解,引起荧光信号的变化,可以用于可视化分析肾细胞内吞白蛋白的动态过程。结论:探针DDABP具有很高的选择性、灵敏性和抗干扰能力,可以作为一个非常有前景的工具分子,用于研究HA介导的生物过程,对于探索HA相关疾病的基础研究和临床诊断意义重大。