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摘要：口蹄疫病毒是一种单链RNA病毒,可以导致偶蹄动物口蹄疫的发生,从而引发动物蹄部、舌部出现水泡。口蹄疫病毒包括7个血清型,至少65个亚型,变异性比较强,疫苗较难防治。干扰素Y是Ⅱ型干扰素,可以抵抗病毒在机体的感染复制。本实验用PK-15细胞进行实验,用干扰素处理细胞后再感染口蹄疫病毒,来研究干扰素的抗病毒机制,以增加宿主自身的抗病毒能力,增强机体的免疫性,以抵御病毒的感染。本研究利用表达谱测序来全面准确的研究干扰素对口蹄疫病毒的抵抗机制,共设立四个实验组：未加干扰素未感染口蹄疫病毒组(IFN-0)、加入5ng/mL干扰素未感染口蹄疫病毒组(IFN-5)、未加干扰素感染口蹄疫病毒组(FIFN-0)、加入5ng/mL干扰素感染口蹄疫病毒组(FIFN-5),将这四个组的RNA样品进行测序。测序显示IFN-0、 FIFN-0、FIFN-5共同表达基因为14670个,占总基因数的57.9%。我们以FDR<0.05与基因表达倍数差异两倍以上作为阈值来筛选不同处理组之间的差异表达基因。在FIFN-0与IFN-0组对比后发现：191个基因表达上调,124个基因表达下调；而将FIFN-5与FIFN-0比较,发现有133个基因上调,62个基因下调。GO显著性分析结果显示：IFN-0vs FIFN-0比较组,差异基因聚集在生物过程的负调节、细胞过程的正调节；而FIFN-0vs FIFN-5对病毒的反应,抗原加工递呈、免疫反应、防御反应等都是差异基因GO聚集富集较为明显的。Pathway显著性富集结果分析显示IFN-0vs FIFN-0比较组,p53途径差异基因富集较显著；而FIFN-0vs FIFN-5组抗原加工递呈途径、吞噬体途径、补体系统差异基因富集较为显著。Western blotting结果显示TAP1、 OAS1在FIFN-5表达升高,FIFN-0表达较低,PARP在IFN-0、FIFN-5中剪接体较少,在FIFN-0中剪接体较多,也说明了未加干扰素感染口蹄疫细胞凋亡比较多。用实时荧光定量PCR对测序结果进行验证,根据GO及Pathway富集分析结果选取的九个基因：OAS1、OAS2、MX1、IFIT1、RIG-1、 CTGF、F3、RCAN1和PLAU进行qPCR,发现这九个基因在不同样品中的表达趋势与测序趋势是相一致的,说明测序结果是准确可信的。其中OAS1、OAS2、MX1、IFIT1、RIG-I在FIFN-5组表达升高较为明显,在FIFN-0中较低,这些基因又同属于干扰素诱导产生的基因,RIG-Ⅰ的表达也促进了RIG-Ⅰ通路的表达,CTGF、F3、RCAN1和PLAU在FIFN-0组表达上调,在FIFN-5组中低表达,可能是病毒作用细胞后使细胞发生了凋亡。总的看来,加入干扰素后,抗原递呈能力,机体的免疫能力增强,抗病毒能力加强。本实验进一步扩增了TAP1基因的全长片段,并进行pcDNA3.1、pEGFP重组载体的构建,为研究其在PK15细胞中的抗病毒机制提供了材料。上述实验结果说明：PK15细胞加入干扰素后可以通过提高先天性及适应性免疫反应能力,并能抑制细胞的凋亡,以增强对口蹄疫病毒的抵抗能力。