原发性肝癌(Primary Liver Cancer，PLC)是全世界最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着人类的健康，其发病机制目前仍不明确。肝癌发病多见于青壮年男性，男女比例国内为6.3:1，国外为11:1，且女性肝癌预后明显优于男性。近年来的文献研究显示，甾体激素尤其是性激素与肿瘤的发生发展有着密切的联系，肝癌患者体内激素水平改变明显。本研究采用液相色谱-串联质谱法测定人血清中糖皮质激素和性激素水平，分析对比肝癌患者和健康志愿者体内存在显著性差异的激素，对激素水平与肝癌病程以及术后复发作相关性研究，探讨激素失衡参与原发性肝癌的发生、发展过程，探究其作为肝癌病情变化及术后复发参考指标的可行性。第一部分以对羟基联苯为内标，采用高效液相色谱-电喷雾离子源-串联四级杆质谱技术(HPLC-ESI-MS/MS)，建立了人体内雌三醇、雌二醇和雌酮3种雌激素的含量测定分析方法。血清样品前处理采用液-液萃取法，经乙酸乙酯提取雌激素后，采用丹磺酰氯作为衍生化试剂，在一定的pH条件下进行衍生化反应，对反应产物进行分析。流动相为乙腈-0.1%甲酸水，在EC-C18柱上进行分离，质谱检测采用正离子条件下电喷雾离子源，MRM模式监测。该方法定量限可达20pg/mL，灵敏度高且血清中的其他成分不影响被测物的定量。方法学验证结果表明3种雌激素在相应的线性范围内线性关系良好；日内和日间精密度小于15%；雌酮的基质效应约为60-70%，雌三醇和雌二醇的基质效应、回收率均在85%-118%之间；样品在室温、进样器、三次冻融循环和长期存放过程中均保持稳定。所建立的方法适用于肝癌患者及健康志愿者体内雌激素水平的分析和检测。第二部分以倍他米松为内标，在正离子模式条件下建立高效液相色谱-电喷雾离子源-串联四级杆质谱法(HPLC-ESI-MS/MS)方法对血清样本中的氢化可的松（糖皮质激素）、睾酮和雄烯二酮（雄激素）和黄体酮（孕激素）进行含量测定。采用甲基叔丁基醚作为萃取溶剂，具有提取效率高，基质效应小的优点。分析色谱柱为EC-C18柱，流动相为乙腈-0.1%甲酸水，梯度洗脱，质谱监测采用Dynamic MRM模式。总离子图表明在分析时间内4种甾体激素有足够的分离度，背景噪音较小且无干扰被测物的信号。方法学结果显示该方法操作简便、灵敏度和准确度较高。4种甾体激素在相应的线性范围内线性关系良好；日内和日间精密度、基质效应、回收率、稳定性均符合生物样品的分析方法学要求。收集本院2012年2月到8月收治的180例原发性肝癌患者以及61例门诊体检健康志愿者的血清样本，清晨空腹抽取静脉血2mL，分离血清，采用上述HPLC-MS/MS法测定体内7种甾体激素含量，数据采用SPSS18.0统计分析，比较健康志愿者和肝癌患者体内激素水平差异。结果显示糖皮质激素和雄激素在肝癌患者体内水平降低，雌激素在肝癌患者体内水平升高；原发性肝癌患者体内存在性激素失衡的现象，雌二醇/睾酮比值高于正常人水平。随着肝癌病情的发展，肝癌患者体内雌二醇/睾酮的比值逐渐升高，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期差异显著。通过对6例病人术前及术后第一天血清样本中甾体激素水平的比较，发现6例患者在肿瘤切除后体内雌二醇/睾酮比值均有一定程度降低。随访30例肝癌手术切除后患者，与未复发者相比，术后3个月内复发者具有较高的雌二醇/睾酮比值。可初步判定较高的雌二醇/睾酮水平是肝癌复发的危险因素。本研究结果表明肝癌的发生、发展以及术后复发过程与患者体内的性激素紊乱有一定关系，可将性激素水平作为肝癌临床诊断及术后复发的有效参考指标。