目的:检测PKHD1基因在胆管癌(CC)及癌旁正常组织中的表达,研究CRISPR/Cas9敲除PKHD1对人肝内胆管癌HCCC-9810及RBE细胞株的细胞行为学能力影响,测定Notch通路相关蛋白,观察敲除组细胞株的成瘤能力,通过体内及体外,细胞及动物实验探索PKHD1潜在的作用机制。方法:运用qRT-PCR检测PKHD1在CC及正常肝组织中的表达情况。设计PKHD1 guide RNA,构建CRISPR/Cas9双载体基因敲除PKHD1慢病毒系统,分别感染HCCC-9810及RBE细胞。采用PCR测序验证重组质粒构建以及PKHD1基因的敲除效果。Edu法检测Hucct-1细胞增殖状况。划痕实验、Transwell细胞试验观察敲除PKHD1前后细胞迁移和侵袭能力变化。采用Western blot检测Notch通路相关调控蛋白的表达变化。构建裸鼠皮下荷瘤模型,观察裸鼠移植瘤生长,30天后处死裸鼠,测量肿瘤体积和重量,免疫组化法检测各组裸鼠荷瘤组织中PKHD1及MMP9蛋白的表达水平。结果:PKHD1在CC组织中的mRNA表达水平均显著低于正常组织(P<0.01);成功构建了PKHD1基因部分敲除的稳定HCCC-9810及RBE细胞系;与野生型细胞相比,PKHD1基因部分敲除后,Notch、Jagged-1、NICD蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。敲除组中细胞的增长明显快于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),同时阴性及空白对照未见显著差异(P>0.05)。划痕实验示PKHD1基因部分敲除后细胞迁移能力增强。transwell小室证实敲除组穿过小室的能力与两对照组相比显著增加(P<0.01),同样阴性及空白对照组间没有显著差异(P>0.05);裸鼠皮下种植瘤结果发现,敲除组裸鼠皮下种植瘤生长速度、最终体积及质量明显大于空白对照组及阴性对照组,瘤组织内PKHD1蛋白表达明显降低,与细胞上皮间质转化相关的基质金属蛋白酶MMP9在PKHD1基因敲除组荷瘤组织中表达上调。结论:PKHD1基因在肝内胆管癌组织中表达降低,在HCCC-9810和RBE细胞中靶向敲低PKHD1能显著促进人肝内胆管癌细胞的增殖、侵袭迁移及体内肿瘤的生长能力,PKHD1基因可能通过Notch信号通路发挥其抑癌效应。