论文部分内容阅读
【目的】应用实时定量PCR、免疫印迹、免疫组化的方法检测4种宫颈癌细胞系以及135例临床标本中GPX3基因mRNA及蛋白水平的表达状况。通过甲基化PCR(MSP)检测各宫颈细胞和宫颈组织中GPX3基因启动子区甲基化的状态，在体外试验中通过5aza-dC诱导宫颈癌细胞去甲基化后检测GPX3基因表达及其生物学行为的改变来探讨GPX3基因启动子区甲基化在宫颈癌发生发展可能的作用。【方法】1.收集华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科2004-2008年期间住院手术的临床标本135例，其中正常宫颈组织63例，宫颈癌组织72例，分别应用实时定量PCR及免疫组化的方法来检测正常宫颈组织和宫颈癌组织中GPX3基因mRNA及蛋白水平的表达情况。2.对以下4种来源于宫颈癌细胞系：Siha、Hela、C33a、Caski，分别采用实时定量PCR及免疫印迹法来检测GPX3基因mRNA及蛋白水平的表达情况。3.提取各宫颈癌细胞系及宫颈组织基因组DNA，通过亚硫酸氢盐处理后MSP鉴定各宫颈细胞系、正常宫颈组织及宫颈癌组织中GPX3基因启动子区甲基化的状态。4.应用5aza-dC诱导各宫颈细胞系Siha、Hela、C33a、Caski去甲基化后检测GPX3基因表达及其生物学行为。【结果】1.在mRNA水平，GPX3在宫颈癌组织中的表达远远低于正常宫颈组织；在蛋白水平，GPX3主要表达于正常宫颈上皮细胞以及腺体内，在宫颈癌组织中主要表达于癌旁组织，而在癌细胞内表达是下降的。在各宫颈癌细胞内，GPX3的无论在mRNA还是蛋白水平都是低表达的。2. GPX3基因启动子区甲基化状态与其蛋白表达呈负相关，GPX3的表达水平随着其甲基化程度的加重而降低。3.通过5aza-dC诱导各宫颈细胞去甲基化后GPX3的表达被上调，细胞的增殖，侵袭运动能力下降，而凋亡率升高。【结论】GPX3基因启动子区甲基化导致其表达下调在宫颈癌的发生发展中发挥了非常重要的作用。