番茄果实中NEVER-RIPE基因的克隆及其反义表达载体的构建

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从粉红期番茄果实中提取总RNA,根据Genebank中NEVER-RIPE(即NR基因)cDNA序列,设计合成特异性引物,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)进行cDNA扩增,获得一个 715 bp左右的扩增产物,克隆于 pGEM-T easy载体,测序确定其正确性。将该扩增产物反向克隆到植物表达载体pBI121中,通过PCR及限制性内切酶酶切鉴定重组质粒。将重组表达质粒导入根癌农杆菌LBA4404中,PCR及限制性内切酶酶切确定质粒已被导入。
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