【摘 要】
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为了实现犬瘟热病毒（Canine distemper virus, CDV）核衣壳蛋白（N蛋白）在原核表达系统中的高效表达，试验参考GenBank中发布的CDV N基因序列（登录号为DQ522030.1）,在不改变N蛋白氨基酸序列的情况下，对该基因的密码子进行优化，化学合成N基因，并将其克隆至原核表达载体pET28a（+）中，构建重组质粒pET28a-CDV N,将该质粒转化至大肠杆菌BL21（D
【基金项目】
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重庆市技术创新与应用示范专项（cstc2018js cxmszd X0049）； 重庆市生猪产业技术体系项目（20211105）； 重庆市巴南区科技计划项目（2020TJZ008）； 重庆理工大学研究生创新基金项目（lgycx 20202128）；
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为了实现犬瘟热病毒（Canine distemper virus, CDV）核衣壳蛋白（N蛋白）在原核表达系统中的高效表达，试验参考GenBank中发布的CDV N基因序列（登录号为DQ522030.1）,在不改变N蛋白氨基酸序列的情况下，对该基因的密码子进行优化，化学合成N基因，并将其克隆至原核表达载体pET28a（+）中，构建重组质粒pET28a-CDV N,将该质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中进行表达，经IPTG诱导表达后利用His-tag镍柱进行纯化，对纯化后的CDV N重组蛋白进行SDS-PAGE电泳鉴定、浓度测定、Western-blot鉴定，并用犬瘟热抗原快速检测卡检测该重组蛋白的免疫反应性。结果表明：经PCR扩增成功合成大小约为1 581 bp的CDV N基因；重组质粒pET28a-CDV N经过NdeⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定，在1 581 bp处出现条带，与预期结果相符；在诱导温度为30℃、IPTG诱导终浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为8 h时，CDV N重组蛋白的表达量最高。经His-tag镍柱纯化，得到的CDV N重组蛋白纯度较高，浓度达1.783 0 mg/mL,在60 ku处可见明显的蛋白印迹，犬瘟热抗原快速检测卡可检测出清晰的条带。说明CDV N重组蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中成功表达，且免疫反应性良好。
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