【摘 要】
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目的 从目前已知的人类miRNA中筛选出能特定靶向结合P2X33′端非编码区(3′UTR),并能引起P2X3表达下调的miRNA.方法 利用生物信息学软件预测P2X33′UTR的靶向miRNA,构建P2X33
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科, 武汉,430030
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目的 从目前已知的人类miRNA中筛选出能特定靶向结合P2X33′端非编码区(3′UTR),并能引起P2X3表达下调的miRNA.方法 利用生物信息学软件预测P2X33′UTR的靶向miRNA,构建P2X33′UTR荧光素酶报告基因系统质粒,该质粒同预测的miRNA共转染293TN细胞,并检测相对荧光素酶活性;将筛选出的miRNA转染293TN细胞,选择出能下调P2X3表达的miRNA;构建P2X33′UTR突变体荧光素酶报告基因系统质粒,与相应的miRNA共转染后检测相对荧光素酶活性,得到通过结合P2X33′UTR下调P2X3表达的miRNA.结果 应用Tar-getScan等软件预测出有21种潜在的miRNAs可能与人P2X3靶向结合,在此基础上构建了包含P2X33′UTR全长的双荧光素酶报告系统psiCHECK2-P2X3,该载体质粒分别与上述21种miR-NAs共转染293TN细胞后,通过检测报告基因的表达及转录后水平的变化进行筛选,结果初步证实共有3种miRNAs(hsa-miR-491-5p、hsa-miR-1178和hsa-miR-1291)能够靶向结合P2X3的3′UTR,并显著下调其表达.结论 本研究通过对人P2X3 miRNAs的筛选和鉴定,初步发现有3种miRNAs(hsa-miR-491-5p、hsa-miR-1178和hsa-miR-1291)可调控P2X3的表达.
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