【摘 要】
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鸭（Anas platyrhynchos） α干扰素（interferon α, IFNα）具有广谱的抗病毒活性，禽β防御素2 （avianβ-defensin 2, AvBD2）具有广谱的抗菌活性。本研究利用毕赤酵母（Pichia pastoris）分泌表达鸭IFNα-Av BD2融合蛋白并明确IFNα-AvBD2的生物学活性，对于现有无抗养殖条件下的鸭疫病防控具有重要意义。本课题组在前期工作中
【基金项目】
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2020年度石家庄市重点研发项目（201208）；
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鸭（Anas platyrhynchos） α干扰素（interferon α, IFNα）具有广谱的抗病毒活性，禽β防御素2 （avianβ-defensin 2, AvBD2）具有广谱的抗菌活性。本研究利用毕赤酵母（Pichia pastoris）分泌表达鸭IFNα-Av BD2融合蛋白并明确IFNα-AvBD2的生物学活性，对于现有无抗养殖条件下的鸭疫病防控具有重要意义。本课题组在前期工作中已成功构建了原核表达质粒pET32a-AplIFNα-AvBD2，并在大肠杆菌（Escherichia coli）中成功表达。本研究以实验室保存的pET32a-AplIFNα-AvBD2为模板，通过PCR方法扩增得到AplIFNα-AvBD2成熟蛋白的基因片段，构建重组质粒pPICZαA-AplIFNα-AvBD2；将线性化的重组质粒电转化至毕赤酵母KM71H感受态细胞，阳性重组菌经甲醇诱导表达，对表达产物进行体外生物学活性研究。SDS-PAGE和Western blot结果显示，AplIFNα-AvBD2重组蛋白分子量约为24 kD；琼脂扩散法和微量稀释法表明重组蛋白对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和大肠杆菌有较强的抗菌活性；细胞病变抑制法检测重组蛋白抗病毒活性为1.2×10~5 U/mL，比活性为5.2×10~5 U/mg;MTT细胞毒性试验显示重组蛋白对非洲绿猴肾细胞（Vero）无毒。上述结果说明，AplIFNα-AvBD2可在毕赤酵母中分泌表达，同时具有抗菌活性和抗病毒活性。本研究为AplIFNα-AvBD2的进一步应用提供了基础资料。
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