【摘 要】
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目的 构建人AP2β基因慢病毒(lentivirus)表达载体,并检测其过表达对肝癌细胞HepG2生长的影响.方法 从人乳腺文库中采用PCR技术扩增出人AP2β基因编码序列,并将其插入pCDH载
【机 构】
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军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京,100850;河北医科大学第三医院感染科,石家庄,071000
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目的 构建人AP2β基因慢病毒(lentivirus)表达载体,并检测其过表达对肝癌细胞HepG2生长的影响.方法 从人乳腺文库中采用PCR技术扩增出人AP2β基因编码序列,并将其插入pCDH载体,获得pCDH-AP2β真核表达载体;将其与包装载体转染293T,包装成Lenti-AP2β慢病毒并测定病毒滴度,感染肝癌HepG2细胞,Western印迹检测病毒载体介导的AP2β蛋白的表达情况,并进行生长曲线实验研究过量表达AP2β对HepG2细胞生长的影响.结果 双酶切和Western印迹表明,pCDH-AP2β真核表达质粒构建成功,包装成滴度为2.5×107 PFU/ml的Lenti-AP2β慢病毒载体;将此慢病毒载体感染HepG2细胞,Western印迹显示,慢病毒载体成功表达AP2β,生长曲线和克隆形成实验结果 表明,AP2β过表达可抑制肝癌细胞HepG2的生长.结论 构建了AP2β的慢病毒表达载体Lenti-AP2β,在HepG2细胞中过量表达AP2β可抑制细胞的生长,该实验为进一步研究AP2β在肝癌中的功能奠定了基础.
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