志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光聚合酶链反应快速检测方法的应用研究

来源 :疾病监测 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sysu_allan
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的建立志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测技术,为从患者、食品和环境中快速分离和鉴定志贺菌提供技术支撑。方法根据志贺菌ipaH基因序列设计一对特异性引物和TaqMan-MGB探针;通过对PCR扩增体系和反应条件的优化,建立志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测方法;用添加已知志贺菌浓度的样本验证方法敏感性;用志贺菌标准菌株、分离株以及大肠埃希菌、沙门菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌验证方法特异性。结果用本研究建立的志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测方法检测志贺菌,其Ct值与模板浓度的对数值具有很好的对应关系(Y=-3.93×log(X)+37.34,R=0.999),最低检测浓度为30cfu/ml,3株志贺菌标准株,30株志贺菌分离株检测结果均为阳性;而沙门菌、副溶血性弧菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等91株其他细菌的Ct值均>35或扩增曲线成一平滑直线。与常规分离鉴定方法比较差异无统计学意义(P>0.05,χ2=0.27)。对于纯菌和食品样品整个检测过程仅需2h和10h。结论志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测技术具有特异性强,敏感性高,易操作等优点,有很好的应用前景和研究价值。 Objective To establish a rapid real-time PCR detection system for TaqMan-MGB probe of Shigella to provide technical support for the rapid isolation and identification of Shigella from patients, food and environment. Methods According to the sequence of ipaH gene of Shigella, a pair of specific primers and TaqMan-MGB probe were designed. Through the optimization of PCR amplification system and reaction conditions, a real-time fluorescent PCR rapid detection method of Shigella TaqMan-MGB probe was established. Specificity of the method was verified by adding a sample of known Shigella concentration to the test method; using Shigella standard strains, isolates and pathogenic bacteria such as Escherichia coli, Salmonella, Vibrio parahaemolyticus and Staphylococcus aureus to verify the specificity . Results The Shigella sonnei was detected by real-time fluorescent PCR assay of TaqMan-MGB probe of Shigella in this study. The Ct value has a good correspondence with the logarithm of template concentration (Y = -3.93 × log (X) + 37.34, R = 0.999). The lowest detection concentration was 30 cfu / ml. The results of three strains of Shigella and 30 strains of Shigella were all positive. However, Salmonella, Vibrio parahaemolyticus and Escherichia coli , Staphylococcus aureus 91 other bacteria Ct value> 35 or amplification curve into a smooth straight line. There was no significant difference between the method of routine isolation and identification (P> 0.05, χ2 = 0.27). For pure bacteria and food samples the entire testing process only 2h and 10h. Conclusion The real-time PCR detection of Shigella TaqMan-MGB probe has the advantages of strong specificity, high sensitivity, easy operation and so on. It has good application prospect and research value.
其他文献
今年4月11日,广州又一伶星殒落——驰誉粤曲歌坛六十多年的李少芳辞世了!她的名字和曲韵,半个多世纪来曾倾倒厂不少顾曲周郎。直到前年底,她荣获中国唱片公司第三届金唱片奖
颅内高压征是儿科常见急症,处理不当可导致患儿死亡。现将本科近年来收治的445例感染所致高颅压病例分析如下:临床资料一、一般资料:男257例,女188例,男:女=1,4:1,~1岁76例,~3
中考既承载了考查学生对化学基础知识掌握程度的作用(即水平考试),同时还要能体现初中升学的选拔性作用(即选拔性考试)。因而中考化学的实验考查,既要兼顾知识的基础性,又要
一五年前,在香港一批热心人悼念小明星辞世50周年的纪念特刊上,我曾写过两句怀念她的小诗。文曰:“明星虽小名声大,歌坛响遏足千秋。”这十四个字评价小明星并非过誉,对于她
目前,转变观念,摒弃“应试教育”,推进素质教育,已成为人们的共识.但是,如何进行素质教育,应采取什么有效的途径和科学的机制,成为教育战线的人们要研究和探索的问题.
目的研究单糖、pH、温度及时间对青春双歧杆菌、长双歧杆菌和类干酪乳杆菌体外增殖的影响。方法用甘露糖、半乳糖、山梨醇及果糖代替MRS中的葡萄糖,筛选出每种细菌的最适碳源
本报讯在2005年10月30日- 11月3日召开的第13届欧洲肿瘤学会议上,法国Gustave-Roussy学院免疫治疗部的艾斯库迪尔教授公布了一条消息:由拜耳医药保健股份公司和 Onyx制药公司
开展高三数学一轮复习,旨在通过全面复习,巩固基础知识,完善知识网络,掌握数学思想方法,提高分析问题、解决问题的能力.在高三数学复习中,一轮复习所用的时间长(一般为上一年
目的从家蝇幼虫血淋巴中分离纯化出有抗弓形虫作用的抗菌肽,观察其对弓形虫速殖子DNA的损伤作用。方法通过损伤加感染的方法诱导家蝇幼虫大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心
1999年召开的第三次全国教育工作会议,通过了关于加强素质教育的决定,这是一个历史性的文件,具有重大的现实意义和深远的历史意义.当前,我们为什么要特别强调对大学生的素质