【摘 要】
：
[背景]诺如病毒(Norovirus,NoV)是引发全球人类急性胃肠炎的主要食源性致病原,具有广泛的遗传多样性,其中GⅡ.17型是亚洲地区的优势流行株,危害最为严重.研究表明,通过基因工程技术制备的诺如病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)具有良好的免疫保护作用,是目前NoV疫苗研发的主要思路.[目的]利用大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统制备GⅡl.17型诺如病毒的VLP,为GⅡ.17型NoV疫苗的研发奠定基础.[方法]合成GⅡ.17型NoV衣壳蛋白VP1的基
【机 构】
：
南阳师范学院生命科学与农业工程学院河南省畜禽保健品工程技术中心,河南南阳473061;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100
论文部分内容阅读
[背景]诺如病毒(Norovirus,NoV)是引发全球人类急性胃肠炎的主要食源性致病原,具有广泛的遗传多样性,其中GⅡ.17型是亚洲地区的优势流行株,危害最为严重.研究表明,通过基因工程技术制备的诺如病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)具有良好的免疫保护作用,是目前NoV疫苗研发的主要思路.[目的]利用大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统制备GⅡl.17型诺如病毒的VLP,为GⅡ.17型NoV疫苗的研发奠定基础.[方法]合成GⅡ.17型NoV衣壳蛋白VP1的基因并克隆入pET28a-MsyB原核表达质粒中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,通过烟草蚀纹病毒(tobacco etch virus,TEV)蛋白酶去除融合标签,利用His-Tag镍柱纯化获得天然VP1蛋白,利用SDS-PAGE、Western Blot和透射电镜对纯化后的VP1蛋白反应原性及其形成的结构进行初步鉴定.[结果]MsyB-VP1融合蛋白能够以可溶形式大量表达,其最适表达条件为:IPTG浓度0.8 mmol/L,37℃诱导8 h;TEV蛋白酶酶切后的VP1纯化蛋白能够与鼠抗GⅡ.17型NoV VP1多克隆抗体特异性结合,并能够自组装形成直径约为40 nm的病毒样颗粒.[结论]利用原核表达系统成功制备了GⅡ.17型诺如病毒VLP,有望成为GⅡ.17型诺如病毒的候选疫苗.
其他文献
[目的]以嗜酸嗜热硫化叶菌Sulfolobus acidocaldarius的DHH超家族核酸酶(Saci0542)为例,研究其核酸外切酶活性特点,为阐明其在DNA代谢中的具体功能提供生化基础.[方法]将嗜酸嗜热硫化叶菌DHH超家族核酸酶Saci0542基因在大肠杆菌中重组表达,经亲和层析纯化得到电泳纯的重组蛋白;利用荧光标记的寡核苷酸作为底物,用尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,鉴定Saci0542的酶学特征.[结果]重组表达的DHH超家族核酸酶Saci0542具有典型的单链核酸特异性的3\'-5\
[目的]通过对蜜环菌(Armillaria mellea)的富硒驯化,研究各菌株硒耐受性、有机硒含量及生物活性的变化规律,从而获得生物活性更强的蜜环菌,并对富硒蜜环菌的生物学特征进行初步研究.[方法]以Na2SeO3为无机硒试剂对蜜环菌进行富硒驯化;采用氢化物原子荧光光谱法测定蜜环菌的硒含量,热水浴法测定蜜环菌的无机硒含量;根据形态学、生理生化特征筛选优良的蜜环菌菌株.[结果]蜜环菌对无机硒有较好的富集能力.菌株J-234对Na2SeO3的耐受浓度为100 mg/L,菌株M-H和A-10对Na2SeO3的
[背景]羊肚菌是全球广泛分布的物种,具有重要的经济和科研价值,其根际微生态系统各要素间的相关性研究相对较少.[目的]探究甘肃省不同地区野生羊肚菌根际土壤中细菌群落-土壤理化性质及细菌群落-酶活性相关性.[方法]采用Illumina MiSeq高通量测序技术,对细菌群落组成进行测量,进而分析其多样性,最终揭示细菌群落-土壤理化性质及细菌群落-酶活性相互关系.[结果]根际土壤pH值随海拔升高而降低,然而土壤中大量元素含量、微量元素含量及酶活性随采样点呈现无规则变化.变形菌门(Proteobacteria)和放
[目的]本文探究了3种室温保存剂和-80℃C冷冻保存对粪便样本中菌群结构的影响,为大规模、标准化的采样提供参考.[方法]本研究采集了5名健康志愿者的新鲜粪便作为测试样本,采用4种不同的保存方式保存:DETs室温保存、GITC室温保存、RNAlater室温保存和-80℃冷冻保存,在保存0、1、3、7、14、28 d后,采用高通量测序技术测定样本中微生物16S rRNA基因V3-V4区序列,通过比较不同保存剂、不同保存时间后的样本与新鲜样本的差异,分析保存剂和保存时间对粪便样本菌群组成及丰度的影响.[结果]5
[目的]女贞是我国分布广泛的园林绿化树种、药用植物和资源昆虫白蜡虫的优良寄主植物,解析女贞叶、茎、根、根际土壤4种生态位的细菌群落结构、物种组成和多样性特征,为研究女贞及其相关微生物组的互作及开发利用女贞内生和根际细菌资源奠定基础.[方法]以女贞叶、茎、根、根际土壤为研究材料,基于细菌16S rRNA基因V5-V7区,通过Illumina MiSeq扩增子高通量测序和生物信息学分析,比较女贞不同生态位细菌群落结构、物种组成、功能的差异性和相似性.[结果]女贞4种样本共获得168229条有效序列,聚类后共计
[目的]多重耐药菌株的出现给食品安全带来严重威胁.噬菌体是不同于抗生素的一类重要杀菌因子,对其生物学特性及基因组的研究和分析可为噬菌体的抗菌应用提供依据.[方法]对噬菌体phiP4-7的生物学特性、基因组学、分类学进行研究.[结果]经透射电子显微镜观察,确定phiP4-7头部直径为(50.59±1.68) nm,尾部长度为(76.53±4.90) nm,属于长尾噬菌体科;一步生长曲线结果表明,其潜伏期时间约为25 min,每个感染中心释放的噬菌体数量约为63 PFU/infection center;抑菌
[目的]利用一个GFP的超折叠变体SfGFP (superfolder GFP)对瓦雷兹芽孢杆菌(Bacillus velezensis) FZB42菌株进行标记,以期确立一种瓦雷兹芽孢杆菌及近缘芽孢杆菌通用的高亮GFP标记手段,同时,为了方便后续生物膜和分子互作的相关研究,测试SfGFP基因插入位点,假基因xkdB,作为外源基因表达座位的可行性.[方法]利用基因工程技术构建了一系列质粒,然后通过同源重组的方式,分别获得xkdB敲除菌株FBS373和SfGFP标记菌株FBS374,分别测试这些菌株在生长速
[背景]青海云杉(Picea crassifolia)是中国特有植物,具有极高的生态价值,是西北地区重要的森林更新树种和荒山造林树种,其生长发育及其抗逆性与根系共生真菌多样性密切相关.[目的]从青海云杉根系分离并鉴定定殖的可培养共生真菌,阐明青海云杉根系可培养共生真菌的种类组成,为共生真菌在青海云杉育苗、造林及生态恢复的应用研究提供依据.[方法]采用根段直接分离培养法,对青海云杉根系共生真菌进行分离培养,描述菌落形态特征.结合rDNA ITS序列分析的方法,对分离的真菌进行鉴定.[结果]从青海云杉根系中分
[目的]研究伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)CTO-S对于病毒复制的影响.[方法]利用3\'RACE和5\'RACE鉴定CTO-S的全长序列.验证CTO-S是否具有编码多肽的能力.Red重组方法构建CTO-S缺失株以及回复突变株.分析野毒株、缺失株和回复突变株复制的差异.利用RNA pull down联合质谱的方法筛选与CTO-S互作的宿主蛋白.利用RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipi
[背景]苯酚废水作为一种毒性强、难降解的废水而备受关注.目前,微生物燃料电池(microbial fuel cell,MFC)已经广泛用于苯酚废水的降解,MFC的产电效果和苯酚的降解效率与反应器内的微生物群落有着密切关系.[目的]为了提高MFC的产电效果及对有害物质的降解能力,需要对MFC中苯酚的降解和微生物群落结构进行探索.[方法]分别在开路和闭路情况下,利用高效液相色谱(HPLC)测试MFC对苯酚的去除率;利用16S rRNA基因高通量测序技术分析阴极室中微生物群落的变化.[结果]与开路控制相比,闭路