【摘 要】
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目的探讨Nrf2在病毒性心肌炎小鼠中的表达及葛根素(Pue)治疗后Nrf2的变化及作用。方法将130只BALB/c纯种4周龄雄性小鼠,随机分成对照组(20只)、VMC组(30只)、Nrf2激活剂组(20只)、不同浓度Pue组(各20只),用柯萨奇B3型病毒(CVB3),通过VMC经典造模方法进行造模。分别在实验第0、4、7、14、28天采血、杀鼠,留取心肌组织。采用流式细胞术检测小鼠心肌细胞的凋亡
【机 构】
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内蒙古自治区人民医院儿科,呼和浩特 010017,吉林大学白求恩第一医院小儿心血管科,长春 130021,内蒙古自治区人民医院儿科,呼和浩特 010017,内蒙古自治区人民医院儿科,呼和浩特 0100
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目的探讨Nrf2在病毒性心肌炎小鼠中的表达及葛根素(Pue)治疗后Nrf2的变化及作用。
方法将130只BALB/c纯种4周龄雄性小鼠,随机分成对照组(20只)、VMC组(30只)、Nrf2激活剂组(20只)、不同浓度Pue组(各20只),用柯萨奇B3型病毒(CVB3),通过VMC经典造模方法进行造模。分别在实验第0、4、7、14、28天采血、杀鼠,留取心肌组织。采用流式细胞术检测小鼠心肌细胞的凋亡情况,应用Real-Time PCR法检测Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA、Fas mRNA、TGF-β1 mRNA的水平及用Western blot法检测Nrf2、HO-1、Fas、TGF-β1的蛋白表达情况。应用统计软件SPSS19.0对结果进行统计学分析,计量资料以均值±标准差(
±s)表示,配对样本用均值t检验,成组资料用双向方差分析,相关性分析应用Spearman相关检验,P<0.05为差异有显著性。
结果Nrf2 mRNA及其蛋白在各组均有表达。通过CPDT以及Pue分析Nrf2与HO-1、Fas、TGF-β1之间的相关关系,得出完全一致的结果,说明Nrf2与HO-1、Fas、TGF-β1之间的关系,不因干预措施的改变而变化。CPDT及Pue组HO-1的转录及蛋白表达明显升高,且与Nrf2呈正相关(r=0.969,P<0.01)。在一定Pue剂量梯度(≤45 mg/kg)下,HO-1的转录及蛋白表达呈剂量依赖性;CPDT及Pue组心肌细胞凋亡数减少,Nrf2与Fas呈负相关(r=-0.968,P<0.01);CPDT及Pue组中TGF-β1在一定的剂量梯度下,随着剂量的增大,TGF-β1表达降低,Nrf2与TGF-β1呈负相关(r=-0.753,P<0.01)。
结论Nrf2在VMC中表达增高,参与VMC的发生、发展过程。Nrf2在VMC中通过上调抗氧化酶HO-1达到抗氧化作用;通过抑制Fas/FasL信号通路实现抗心肌凋亡作用;通过抑制TGF-β1的转录及蛋白表达,抑制心肌纤维化。Pue对VMC的治疗作用是通过激活Nrf2,进而产生抗氧化、抗心肌凋亡和抗心肌纤维化作用。
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