【摘 要】
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[目的]克隆严重急性呼吸综合征冠状病毒2（Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-Co V-2）刺突糖蛋白（Spike,S蛋白），纯化重组蛋白为制备鼠多克隆抗体提供免疫原，并鉴定抗体活性。[方法]依据对S蛋白的氨基酸序列解析，设计并构建了S蛋白重组质粒S713 pc DNA3.1（+）-C-6His，经酶切和测序正确后，转入中国仓鼠
【机 构】
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普洱茶学教育部重点实验室云南农业大学
【基金项目】
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昆明市科技计划项目（2020-1-H-039）；
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[目的]克隆严重急性呼吸综合征冠状病毒2（Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-Co V-2）刺突糖蛋白（Spike,S蛋白），纯化重组蛋白为制备鼠多克隆抗体提供免疫原，并鉴定抗体活性。[方法]依据对S蛋白的氨基酸序列解析，设计并构建了S蛋白重组质粒S713 pc DNA3.1（+）-C-6His，经酶切和测序正确后，转入中国仓鼠卵巢细胞（CHO-K1）中进行诱导表达，SDS-PAGE鉴定融合蛋白表达情况。表达产物利用Ni柱和分子筛纯化，目的蛋白混合免疫佐剂AS03免疫ICR小鼠，制备S蛋白多克隆抗体并对通过中和实验进行鉴定。[结果]成功构建重组质粒S713 pc DNA3.1（+）-C-6His，在CHO-K1细胞中S蛋白以可溶性形式表达。可溶性目的蛋白纯化后，蛋白纯度为94.4%，作为免疫原制备鼠多克隆抗体，抗体效价为1∶400，中和实验显示该多抗具有保护作用。[结论]成功诱导表达、纯化重组S蛋白并制备其多克隆抗体，为深入研究新冠病毒感染、发病机制及新型肺炎的防治奠定基础。
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