目的：鉴定肛周脓肿患者的病原菌分布情况，分析其对常用抗菌药物的耐药性。方法：选取2018年1月-2020年12月吉安市中心人民医院收治125名肛周脓肿患者，对其送检的肛周脓液进行培养，采用珠海美华MA-120半自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定与药敏试验。结果：125例患者的脓液标本中共分离培养出135株菌，其中革兰阴性菌108例，占比80%；革兰阳性菌27株，占比20%；排名前三的细菌分别为大肠埃希菌99株（73.3%）、肺炎克雷伯菌8株（5.9%）和金黄色葡萄球菌7株（5.2%）。大肠埃希菌产ESBL菌株为42.42%（42/99），高于肺炎克雷伯菌12.50%（1/8）。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）占比28.6%（2/7），星座链球菌对红霉素和克林霉素的敏感率均为33.3%，对其他常用抗生素的敏感率均为100%。结论：肛周脓肿患者的病原菌分布存在一定差异，病原菌以大肠埃希菌为主。临床用药期间，需要根据细菌培养结果与耐药性分析结果，调整用药方案，避免选药不合理影响药物的治疗效果。