猪博卡病毒1型/2型PCR检测方法的建立

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猪博卡病毒(PBoV)是2009年新发现的一种DNA病毒,常于腹泻仔猪体内检测到该病毒.为建立该病毒的检测方法,本研究根据GenBank中登录的PBoV 1/2型的高度同源保守序列设计一对特异性引物,经PCR扩增条件优化,建立了PBoV 1/2型的PCR检测方法.特异性试验结果显示,该PCR方法仅从PBoV 1或2型的阳性病料样品中特异性的扩增出751 bp的目的片段,而对猪伪狂犬病毒、圆环病毒、大肠杆菌、沙门氏菌的核酸样品的扩增结果均为阴性.敏感性试验显示,该PCR方法对PBoV 1/2重组质粒标准品的最低检测量为34.8拷贝/μL.对来自河南中牟、开封、兰考、濮阳、洛阳等地猪场发生腹泻疫情的70份猪病料样品,采用该方法进行检测,其中10份样品呈PBoV 1/2型阳性,阳性率为14.29%.该PCR检测方法的建立为PBoV1/2型的诊断和监测提供技术支持.
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