靶向大鼠HIF-1α的RNAi慢病毒载体的构建及鉴定

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目的构建靶向HIF-1α的RNAi慢病毒载体,为进一步观察其对难治性癫痫大鼠模型脑内HIF-1α基因过度表达的干扰作用奠定基础。方法根据GenBank报道的大鼠HIF-1α基因序列,选择4个靶序列,设计并合成4对舍编码短发夹RNA(shRNA)序列的寡核苷酸,双链退火后,插入经限制性内切酶AgeⅠ和EcoRⅠ处理所得的线性化慢病毒我体pGCSIL—GFP(表达绿色荧光蛋白,GFP)的U6启动子下游,合成4种重组病毒pGCSIL-GFP—shRNA1,2,3,4,经酶切和测序鉴定构建正确后,分别与Lipof
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