【摘 要】
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以双元载体pPZP100为骨架,通过酶切、连接将标记基因(潮霉素-绿色荧光蛋白,HygR-GFP)及碳色长蠕孢(Helminthosporium carbonum)非核糖体肽合成酶基因(HcNPS6)侧翼序列插入目
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以双元载体pPZP100为骨架,通过酶切、连接将标记基因(潮霉素-绿色荧光蛋白,HygR-GFP)及碳色长蠕孢(Helminthosporium carbonum)非核糖体肽合成酶基因(HcNPS6)侧翼序列插入目标载体pPZP100,构建HcNPS6基因敲除载体,并采用冻融法将pPZP100HygR-GFPHcNPS6转入农杆菌菌株AGL-1。挑取经氨苄/氯霉素筛选的重组子进行菌落PCR鉴定。结果表明,敲除载体已成功转入农杆菌AGL-1。
The double-stranded vector pPZP100 was used as the backbone. The tagged genes (hygromycin-green fluorescent protein, HygR-GFP) and the Helminthosporium carbonum non-ribosomal peptide synthetase gene (HcNPS6) The sequence was inserted into the target vector pPZP100 to construct the HcNPS6 knockout vector. The pPZP100HygR-GFPHcNPS6 was transformed into Agrobacterium strain AGL-1 by freeze-thawing method. Pick the ampicillin / chloramphenicol selected recombinant colony PCR identification. The results showed that the knockout vector was successfully transferred into Agrobacterium AGL-1.
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