【摘 要】
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目的 建立单核细胞化学吸引蛋白质1(MCP-1)小分子干扰RNA(siRNA)人肾小管上皮细胞株,并检测MCP-1 siRNA对人肾小管上皮细胞(HKC)MCP-1基因的抑制效应.方法 针对人MCP-1 mRNA
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目的 建立单核细胞化学吸引蛋白质1(MCP-1)小分子干扰RNA(siRNA)人肾小管上皮细胞株,并检测MCP-1 siRNA对人肾小管上皮细胞(HKC)MCP-1基因的抑制效应.方法 针对人MCP-1 mRNA 67、116、142位点设计并合成3对MCP-1 siRNA序列.构建MCP-1 特异性siRNA真核表达载体,以脂质体法瞬时转染至HKC.转染24 h后分别应用实时定量RT-PCR及Western印迹技术检测HKC内MCP-1 mRNA、蛋白表达,筛选出抑制效率最高的MCP-1 siRNA.以筛选出的MCP-1 siRNA序列构建慢病毒穿梭质粒.使用慢病毒穿梭质粒进行慢病毒颗粒的包装和生产,得到病毒液并确定其滴度.以病毒液感染HKC,筛选MCP-1 siRNA人肾小管上皮细胞株,并应用实时定量RT-PCR及Western印迹技术检测HKC内MCP-1 mRNA、蛋白表达.结果 成功建市MCP-1特异性siRNA人肾小管上皮细胞株.MCP-1 siRNA稳定转染能下调人肾小管上二皮细胞MCP-1 mRNA(68.49±6.38)%、蛋白(72.97±6.13)%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 MCP-1特异性siRNA能高效抑制HKC内MCP-1基因表达.MCP-1 siRNA人肾小管上皮细胞株的建立为MCP-1基因功能及肾间质纤维化防治研究提供实验材料和依据.
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