从microRNA(miR)组学角度探讨坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复的机制,以期寻找关键治疗靶点。
方法健康雌性Wistar大鼠48只,按随机数字表法分为坐骨神经预损伤+脊髓后索损伤组(15只)、单纯脊髓后索损伤组(15只)、单纯坐骨神经损伤组(15只)和对照组(3只)。在脊髓后索损伤前7d切断大鼠双侧坐骨神经,脊髓后索损伤后4 h、1 d、3 d、7 d每组取3只大鼠处死并取与双侧坐骨神经对应的背根神经节,miR芯片分析miR表达谱;实时定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-182、cAMP应答元件结合蛋白(CREB) mRNA的表达;Western blotting、ELISA分别检测CREB、p-CREB蛋白的表达和cAMP含量;脊髓后索损伤后14 d取损伤段脊髓,HE染色,免疫组化染色检测脊髓后索神经丝蛋白NF-200的表达。
结果与对照组相比,坐骨神经损伤+脊髓后索损伤组、单纯脊髓后索损伤组大鼠损伤后不同时间共有681个miRNA表达发生变化。与单纯脊髓后索损伤组比较,坐骨神经损伤+脊髓后索损伤组损伤后3d和7 d miR-182表达下调;与对照组相比,单纯坐骨神经损伤组大鼠背根神经节miR-182、坐骨神经损伤+脊髓后索损伤组背根神经节CREB mRNA的表达均无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,坐骨神经损伤+脊髓后索损伤组大鼠损伤后3d、7d背根神经节CREB和p-CREB蛋白表达,4 h、1 d、3 d、7 d背根神经节cAMP的含量均增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色检测显示坐骨神经损伤+脊髓后索损伤组脊髓后索损伤中心尾端NF200表达比单纯脊髓后索损伤组增加,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤的修复,机制与背根神经节中miR-182下调、cAMP上调,从而导致磷酸化CREB蛋白增加有关。