套式聚合酶链反应检测伤寒杆菌DNA及其临床应用

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应用套式聚合酶链反应(nested-PCR)技术,建立了扩增伤寒杆菌鞭毛蛋白基因多变区特异核苷酸序列的方法。对9株沙门氏菌及7株其他临床分离菌进行检测,结果仅伤寒杆菌扩增出343bp特异性片段,以γ-32PATP标记的为伤寒杆菌特异的寡核苷酸探针对扩增产物做Southern印迹杂交,证实上述结果可靠。扩增灵敏度为30fg伤寒杆菌DNA(约10个菌体)。对69例发热待查患者的78份血标本进行检测,其敏感性(100%)明显高于传统(血,骨髓)培养法(73%),P<0.01;特异性均为100%。另外,其检出敏感性不受预先抗菌治疗的影响,整个实验在10~12小时内完成。以上表明nested-PCR是一种快速、敏感、特异诊断伤寒的方法。

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