【摘 要】
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目的 研究微小RNA(miR)-34c-5p在胃癌组织中的表达及调控胃癌细胞侵袭和迁移机制。方法 利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测人胃癌组织及胃癌细胞中miR-34c-5p mRNA表达;在人胃癌细胞中构建miR-34c-5p过表达模型,倒置荧光显微镜观察慢病毒转染情况,RT-qPCR验证转染效率。利用划痕实验、Transwell实验检测过表达miR-34c-5p对胃癌细胞侵袭
【基金项目】
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宁夏回族自治区重点研发项目(No 2019BEG03007); 宁夏自然科学基金资助项目(No 2020AAC03184,2022AAC03368);
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目的 研究微小RNA(miR)-34c-5p在胃癌组织中的表达及调控胃癌细胞侵袭和迁移机制。方法 利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测人胃癌组织及胃癌细胞中miR-34c-5p mRNA表达;在人胃癌细胞中构建miR-34c-5p过表达模型,倒置荧光显微镜观察慢病毒转染情况,RT-qPCR验证转染效率。利用划痕实验、Transwell实验检测过表达miR-34c-5p对胃癌细胞侵袭和迁移的影响;通过Western blot检测各组胃癌细胞中MAP2K1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表达情况。双萤光素酶报告基因检测MAP2K1是否是miR-34c-5p的靶基因。结果 miR-34c-5p mRNA在10例人胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P<0.05);miR-34c-5p mRNA在胃癌HGC-27细胞中的表达明显低于正常胃黏膜GES-1细胞(P<0.01);与空白对照组、miR-34c-5p-NC组比较,miR-34c-5p-mimics组miR-34c-5p mRNA表达水平明显升高(P<0.05);划痕实验及Transwell实验结果表明,过表达miR-34c-5p明显抑制了胃癌细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05,P<0.01);Western blot检测结果表明,过表达miR-34c-5p后胃癌HGC-27细胞中MAP2K1、Vimentin蛋白表达水平明显降低,E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05);此外,与mimic-NC+miR-34c-5p-mimics组相比,转染pmiR-MAP2K1-WT质粒细胞的萤光素酶活性降低(P<0.01),而转染pmiR-MAP2K1-Mut质粒的萤光素酶活性无改变。结论 miR-34c-5p在胃癌组织和胃癌细胞中低表达,可能通过靶向调控MAP2K1表达抑制胃癌细胞侵袭和迁移。
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