【摘 要】
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目的 探讨大鼠胚胎成纤维细胞（rat embryoic fibroblasts, REFs）在低氧条件下（5%O2）重编程为化学诱导大鼠神经前体细胞（chemically induced rat neural progenitor cells, ciRNPCs）的方法体系。方法 分两阶段将REFs重编程为ciRNPCs，第一阶段是化学诱导产生中间态细胞，REFs在低氧条件下采用含有小分子化合物的组
【基金项目】
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国家自然科学基金（No.81771381）； 国家级大学生创新创业训练项目资助（No.202010367015,202110367044）； 安徽省自然科学基金（No.1908085MH277）； 蚌埠医学院重大科技项目孵育计划（No.2021byfy002）和蚌埠医学院研究生科研创新
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目的 探讨大鼠胚胎成纤维细胞（rat embryoic fibroblasts, REFs）在低氧条件下（5%O2）重编程为化学诱导大鼠神经前体细胞（chemically induced rat neural progenitor cells, ciRNPCs）的方法体系。方法 分两阶段将REFs重编程为ciRNPCs，第一阶段是化学诱导产生中间态细胞，REFs在低氧条件下采用含有小分子化合物的组合VCR（valproic acid、CHIR99021和RepSox）和10 000 U/mL白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor, LIF）的KSR培养基培养15 d，观察到致密细胞集落即中间态细胞形成；第二阶段是特异性诱导ciRNPCs，用胰酶消化中间态细胞，接种至低黏附板，在常氧条件下可形成ciRNPCs神经球。CM-DiI标记后，定向移植至大鼠黑质-纹状体，通过免疫荧光检测ciRNPCs在宿主脑内存活、迁移及分化状况。结果 低氧诱导5～10 d时已观察到明显细胞聚集趋势，15 d时已形成聚集紧密的克隆，1×10~5个细胞中大约产生30个克隆，同时大部分细胞克隆碱性磷酸酶染色呈阳性，消化重铺后2 d即可观察到有神经胚球形成，并可表达神经前体细胞（neural progenitor cells, NPCs）表面特征性抗原（Nestin、Sox2和Pax6），而且具有向神经胶质细胞和神经元分化的能力，分别表达GFAP和Tuj1特异性标志物。移植8周后，大鼠脑内可分化为GFAP+和Tuj1+细胞。结论 小分子化合物VCR组合在低氧条件下可直接诱导REFs重编程为ciRNPCs，并具备体内与体外诱导分化为神经胶质细胞和神经元的潜能，为ciRNPCs移植治疗神经损伤疾病奠定基础。
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