【摘 要】
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目的 建立一套稳定可靠的离体胰岛灌流系统,用于对从动物模型中分离出胰岛的胰岛素第一时相分泌功能的评估.方法 建立离体胰岛灌流系统硬件设备,包括灌流架、输入管道系统、
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目的 建立一套稳定可靠的离体胰岛灌流系统,用于对从动物模型中分离出胰岛的胰岛素第一时相分泌功能的评估.方法 建立离体胰岛灌流系统硬件设备,包括灌流架、输入管道系统、胰岛舱、输出管道系统、恒温水浴系统、微量泵输注系统,共同构成完整的灌流系统.分离胰岛后置于Hanks平衡液,二氧化碳孵箱38℃孵育1 h,将胰岛按每组50个分组.将离体胰岛灌流系统置于37℃水浴,并将微最泵输注系统与其连接.将预先配置好的含2.8 mmol/L葡萄糖的Kerbs-Ringer 碳酸氢盐(ICRB)溶液充填至整个管道系统,在层析柱中加入100μl预先配置好的葡聚糖凝胶,然后将每组50个胰岛转移至层析柱,再加入100μl葡聚糖凝胶.将整个管道系统全部浸入水浴.开始2.8 mmol/L KRB 0.5 ml/h速度灌流1 h,后换为16.7 mmol/L KRB 1 ml/h,以开始16.7 mmol/L KRB灌流为0时间点,在灌流前30、20、10 min、灌流后0、20、40、60、80、100 8和2、3、4、5、7、8、9、10、15、20、25、30 min收集灌流出的液体,-80℃保存后测定胰岛素,根据胰岛素浓度绘制胰岛素第一时相分泌曲线.使用此灌流系统分别对8周龄的db/m和db/db小鼠的胰岛素第一时相分泌进行评估.结果 成功建立离体胰岛灌流系统,并绘制胰岛素第一时相分泌曲线.db/m小鼠离体胰岛在高糖刺激1～2 min时出现最高峰值,达基础水平的7倍左右;而糖尿病db/db小鼠的第一时相分泌显著受损,在整个30 min期间胰岛素浓度仅有轻微上升,是基础值的2.6倍.结论 成功建立的离体胰岛灌流系统,可广泛用于评价离体胰岛的胰岛素第一时相分泌.
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