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摘要：目的 通过对无偿献血者ABO血型正反定型不符进行结果分析，找出影响因素，以便正确鉴定血型，确保临床输血安全。方法 对无偿献血者采血后留样标本分别采用玻板法、微孔板法做ABO血型正反定型试验，正反定型不符时，采用相应措施处理后进一步确认，怀疑有亚型或疑难血型存在时，送本站质管科再次鉴定或送检至中国科学院输血研究所进行分型确证试验。结果 43001份无偿献血标本中共检出21例ABO血型正反定型不符，其中10例ABO血型亚型，4例人为差错，3例冷凝集素，2例标准RBC抗原太弱，2例血清中含有不规则抗体。结论 很多原因可引起ABO血型正反定型不符，在给无偿献血者采血后留样标本定型时，必须做血型正反两次定型，当血型正反定型不符时，必须进行鉴定和确证试验，以确保血型定型准确性，保障临床输血安全。
关键词：无偿献血者；ABO血型；正反定型不符；输血安全
[Abstract]objective through the voluntary blood donors with positive and reverse ABO blood typing discrepant results were analyzed，to find out the influencing factors，so as to correct identification of blood group，to ensure the safety of clinical blood transfusion.Methods blood blood donors who left after specimens were used glass plate method and microplate method to do the ABO blood group typing test，positive and negative stereotypes do not comply，corresponding measures for treating further confirmed by，suspected there are subtypes or difficult group，sent to the station quality control department again identification or inspection to China Academy of Sciences Institute of transfusion were classified and confirmatory test.The results of 43001 blood donors were detected in the specimens of 21 cases of ABO blood group type unconformity，including 10 cases of blood group ABO subtype，4 cases of human error，3 cases of cold agglutinin，2 cases of standard RBC antigen is too weak，with irregular antibody in the serum of 2 cases.Conclusion many reasons can cause positive and reverse ABO blood typing discrepancies，retention sample specimens to voluntary blood donors after blood collection blood group setting，must do two stereotypes，when blood group setting does not comply，must be identified and confirmatory test，to ensure that the blood typing accuracy，guarantee the safety of clinical blood transfusion.
[keyword]Voluntary blood donors with positive and reverse ABO blood typing does not conform to the safety of blood transfusion
自19世纪90年代人类发现血型以来，ABO血型就与临床输血密切相关。临床上一旦输注血型不符的血液制品，就会出现严重的输血反应，危及病人生命。因此，在给无偿献血者ABO血型定型时，必须做血型正反两次定型，以确保血型定型准确性，保障临床输血安全。但是，无偿献血者ABO血型定型时，有部分献血者的血型会出现正反定型不符的现象，其中的原因是多方面的，笔着通过对本站2013年1月～2013年12月43001份无偿献血标本进行ABO血型正反定型试验，检出21例ABO血型正反定型不符，现将其原因分析如下：
1 材料与方法
1.1 标本来源 来自本站2013年1月～2013年12月采集的无偿献血标本43001人份。
1.2 试剂 ABO血型正定型用抗-A、抗-B单克隆标准血清（上海血液生物医药有限责任公司）、ABO血型反定型用标准红细胞（上海血液生物医药有限责任公司），试剂均检验合格，均在有效期内使用。
1.3 仪器 瑞士Xantus全自动加样仪、Metis全自动血库系统判读仪、德国Hettich Universal 32台式离心机、奥地利Anthos振荡器。
1.4 方法 采用玻板法对采血后留样标本（采血辫标本）做ABO血型正定型试验初检，操作方法与结果判断见相关说明书。采用微孔板法对采血后留样标本（采血管标本）做ABO血型正、反定型试验复检。采血管标本用Metis全自动血库系统判读仪法做正、反定型复检，在Xantus全自动加样仪上严格按照试剂说明书编制加样程序，按照加样程序在微孔板上加样完毕后，将微孔板放入台式离心机离心，离心后的微孔板放入振荡器振荡混匀，然后轻轻平放入Metis全自动血库系统判读仪上自动判读结果。当检测有ABO血型正反定型不符时，重新抽取一份新鲜标本并使用质量合格试剂重做一次试验，在排除人为因素及技术问题后，怀疑有亚型或疑难血型存在时，送本站质管科再次鉴定或送检至中国科学院输血研究所进行分型确证试验。 2 结果
43001份无偿献血标本中共检出21例ABO血型正反定型不符，其中10例ABO血型亚型，占47.62%（10/21）；4例人为差错，占19.04%（4/21）；3例冷凝集素，占14.3%（3/21）；2例标准RBC抗原太弱，占9.52%（2/21）；2例血清中含有不规则抗体，占9.52%（2/21）。
3 讨论
3.1 由表可知，43001份无偿献血标本中共检出21例ABO血型正反定型不符，其中10例ABO血型亚型，占47.62%（10/21）；4例人为差错，占19.04%（4/21）；3例冷凝集素，占14.3%（3/21）；2例标准RBC抗原太弱，占9.52%（2/21）；2例血清中含有不规则抗体，占9.52%（2/21）。
3.2 ABO血型亚型占10例（47.62%），在血型正反定型不符中所占比例是较高的。在血清学试验中，ABO亚型常表现为正反定型不符[1]。由于ABO亚型的红细胞抗原性减弱，抗A或抗B的试剂有时不能检测出其抗原性，造成定型困难，尤其在街头初筛检测时，由于试验反应时间不足、抗体试剂效价因素、工作人员匆忙等原因易被误判，往往在站内复检时，通过ABO血型正反定型试验才能发现正反定型不符。因此，ABO亚型是造成ABO血型正反定型不符的主要原因。
3.3 人为差错，工作人员在街头标签贴错、检测样本错放、电脑录入错误、在血型初筛检测时操作不熟练、抗-A和抗-B血清试剂与手指血混匀不充分、凝集时间不足、凝集不完全、加样不规范、标准血清加样错误、血型标识错误、观察时间过短、观察结果的经验不足等，均会造成初筛血型鉴定错误，导致ABO血型正反定型不符。
3.4 冷凝集素也是影响ABO血型正反定型不符的原因之一，冷凝集素属于冷反应性的自身抗体，冷自身抗体的存在妨碍其他抗体的检出，干扰血型的鉴定，一般情况下，健康人血清中含有少量冷凝集素，且效价很低，一般在1∶16以下，在4℃下活性最强，但高效价的冷凝集素在37℃仍可产生较强凝聚，容易造成血型鉴定错误，导致ABO血型正反定型不符。
3.5 标准RBC抗原太弱，由于标准RBC的上的A或B抗原数量较少，在反定型试验时，与抗-A或抗-B反应较弱，甚至不发生凝集，所以有时会误判为O型或其他血型，导致ABO血型正反定型不符。
3.6 不规则抗体也会导致ABO血型正反定型不符，不规则抗体是指ABO血型系统以外的血型抗体，这类抗体并不同于ABO血型系统特点，即抗体出现在相应的抗原缺乏的血清中，在ABO血型正反定型不符中发现的不规则抗体主要为盐水反应性抗体，包括抗-M、抗-N、抗-A1等[2]。在反定型试验中，不规则抗体可以和标准RBC上相应的抗原发生盐水凝集反应，而这种反定型结果与A或B抗原无关，所以导致ABO血型鉴定时正反定型不符。
3.7 在ABO血型定型试验中，导致ABO血型正反定型不符的原因非常复杂，并可同时有多种因素参与其中，除以上原因外，标准血清效价太低、亲和力不强；红细胞悬液过浓、过淡；抗原抗体比例不合适；无偿献血者RBC抗原减弱、血清中相应血型抗体缺乏或抗体效价过低；检测环境温度、反应介质的PH值等，均可以出现弱凝聚或不凝集的现象造成血型鉴定错误，导致ABO血型正反定型不符。
3.8 “疑难血型”是一种血型难以检定或判定的“现象”，而不是一种型别[3]。我们应注意人为差错等主观因素，以及试验场所温度、清洁程度和检测试剂等客观因素的影响。准确鉴定ABO血型是输血工作的基础，也是临床安全、有效输血的重要保证，因此，在工作中，我们必须以严谨、认真的态度，严格按照标准操作规程进行操作，在给无偿献血者采血后留样标本定型时，必须做血型正反两次定型，当血型正反定型不符时，送本站质管科再次鉴定或送检至中国科学院输血研究所进行分型确证试验，以确保血型定型准确性，保障临床输血安全。
参考文献：
[1] 赵祥胜，孟庆宝.献血者Am亚型1例报告[J].中国输血杂志，2003，16（1）：41-42
[2] 赵君，方建华，刘玉振等.不规则抗体引起血型正反定型不符原因分析[J].中国误诊学杂志，2002，2（5）：738.
[3] 兰炯采，陈静娴，马红丽，等.推荐ABO疑难血型三步分析法.中国输血杂志，2010，23（3）：165-168.
关键词：无偿献血者；ABO血型；正反定型不符；输血安全
[Abstract]objective through the voluntary blood donors with positive and reverse ABO blood typing discrepant results were analyzed，to find out the influencing factors，so as to correct identification of blood group，to ensure the safety of clinical blood transfusion.Methods blood blood donors who left after specimens were used glass plate method and microplate method to do the ABO blood group typing test，positive and negative stereotypes do not comply，corresponding measures for treating further confirmed by，suspected there are subtypes or difficult group，sent to the station quality control department again identification or inspection to China Academy of Sciences Institute of transfusion were classified and confirmatory test.The results of 43001 blood donors were detected in the specimens of 21 cases of ABO blood group type unconformity，including 10 cases of blood group ABO subtype，4 cases of human error，3 cases of cold agglutinin，2 cases of standard RBC antigen is too weak，with irregular antibody in the serum of 2 cases.Conclusion many reasons can cause positive and reverse ABO blood typing discrepancies，retention sample specimens to voluntary blood donors after blood collection blood group setting，must do two stereotypes，when blood group setting does not comply，must be identified and confirmatory test，to ensure that the blood typing accuracy，guarantee the safety of clinical blood transfusion.
[keyword]Voluntary blood donors with positive and reverse ABO blood typing does not conform to the safety of blood transfusion
自19世纪90年代人类发现血型以来，ABO血型就与临床输血密切相关。临床上一旦输注血型不符的血液制品，就会出现严重的输血反应，危及病人生命。因此，在给无偿献血者ABO血型定型时，必须做血型正反两次定型，以确保血型定型准确性，保障临床输血安全。但是，无偿献血者ABO血型定型时，有部分献血者的血型会出现正反定型不符的现象，其中的原因是多方面的，笔着通过对本站2013年1月～2013年12月43001份无偿献血标本进行ABO血型正反定型试验，检出21例ABO血型正反定型不符，现将其原因分析如下：
1 材料与方法
1.1 标本来源 来自本站2013年1月～2013年12月采集的无偿献血标本43001人份。
1.2 试剂 ABO血型正定型用抗-A、抗-B单克隆标准血清（上海血液生物医药有限责任公司）、ABO血型反定型用标准红细胞（上海血液生物医药有限责任公司），试剂均检验合格，均在有效期内使用。
1.3 仪器 瑞士Xantus全自动加样仪、Metis全自动血库系统判读仪、德国Hettich Universal 32台式离心机、奥地利Anthos振荡器。
1.4 方法 采用玻板法对采血后留样标本（采血辫标本）做ABO血型正定型试验初检，操作方法与结果判断见相关说明书。采用微孔板法对采血后留样标本（采血管标本）做ABO血型正、反定型试验复检。采血管标本用Metis全自动血库系统判读仪法做正、反定型复检，在Xantus全自动加样仪上严格按照试剂说明书编制加样程序，按照加样程序在微孔板上加样完毕后，将微孔板放入台式离心机离心，离心后的微孔板放入振荡器振荡混匀，然后轻轻平放入Metis全自动血库系统判读仪上自动判读结果。当检测有ABO血型正反定型不符时，重新抽取一份新鲜标本并使用质量合格试剂重做一次试验，在排除人为因素及技术问题后，怀疑有亚型或疑难血型存在时，送本站质管科再次鉴定或送检至中国科学院输血研究所进行分型确证试验。 2 结果
43001份无偿献血标本中共检出21例ABO血型正反定型不符，其中10例ABO血型亚型，占47.62%（10/21）；4例人为差错，占19.04%（4/21）；3例冷凝集素，占14.3%（3/21）；2例标准RBC抗原太弱，占9.52%（2/21）；2例血清中含有不规则抗体，占9.52%（2/21）。
3 讨论
3.1 由表可知，43001份无偿献血标本中共检出21例ABO血型正反定型不符，其中10例ABO血型亚型，占47.62%（10/21）；4例人为差错，占19.04%（4/21）；3例冷凝集素，占14.3%（3/21）；2例标准RBC抗原太弱，占9.52%（2/21）；2例血清中含有不规则抗体，占9.52%（2/21）。
3.2 ABO血型亚型占10例（47.62%），在血型正反定型不符中所占比例是较高的。在血清学试验中，ABO亚型常表现为正反定型不符[1]。由于ABO亚型的红细胞抗原性减弱，抗A或抗B的试剂有时不能检测出其抗原性，造成定型困难，尤其在街头初筛检测时，由于试验反应时间不足、抗体试剂效价因素、工作人员匆忙等原因易被误判，往往在站内复检时，通过ABO血型正反定型试验才能发现正反定型不符。因此，ABO亚型是造成ABO血型正反定型不符的主要原因。
3.3 人为差错，工作人员在街头标签贴错、检测样本错放、电脑录入错误、在血型初筛检测时操作不熟练、抗-A和抗-B血清试剂与手指血混匀不充分、凝集时间不足、凝集不完全、加样不规范、标准血清加样错误、血型标识错误、观察时间过短、观察结果的经验不足等，均会造成初筛血型鉴定错误，导致ABO血型正反定型不符。
3.4 冷凝集素也是影响ABO血型正反定型不符的原因之一，冷凝集素属于冷反应性的自身抗体，冷自身抗体的存在妨碍其他抗体的检出，干扰血型的鉴定，一般情况下，健康人血清中含有少量冷凝集素，且效价很低，一般在1∶16以下，在4℃下活性最强，但高效价的冷凝集素在37℃仍可产生较强凝聚，容易造成血型鉴定错误，导致ABO血型正反定型不符。
3.5 标准RBC抗原太弱，由于标准RBC的上的A或B抗原数量较少，在反定型试验时，与抗-A或抗-B反应较弱，甚至不发生凝集，所以有时会误判为O型或其他血型，导致ABO血型正反定型不符。
3.6 不规则抗体也会导致ABO血型正反定型不符，不规则抗体是指ABO血型系统以外的血型抗体，这类抗体并不同于ABO血型系统特点，即抗体出现在相应的抗原缺乏的血清中，在ABO血型正反定型不符中发现的不规则抗体主要为盐水反应性抗体，包括抗-M、抗-N、抗-A1等[2]。在反定型试验中，不规则抗体可以和标准RBC上相应的抗原发生盐水凝集反应，而这种反定型结果与A或B抗原无关，所以导致ABO血型鉴定时正反定型不符。
3.7 在ABO血型定型试验中，导致ABO血型正反定型不符的原因非常复杂，并可同时有多种因素参与其中，除以上原因外，标准血清效价太低、亲和力不强；红细胞悬液过浓、过淡；抗原抗体比例不合适；无偿献血者RBC抗原减弱、血清中相应血型抗体缺乏或抗体效价过低；检测环境温度、反应介质的PH值等，均可以出现弱凝聚或不凝集的现象造成血型鉴定错误，导致ABO血型正反定型不符。
3.8 “疑难血型”是一种血型难以检定或判定的“现象”，而不是一种型别[3]。我们应注意人为差错等主观因素，以及试验场所温度、清洁程度和检测试剂等客观因素的影响。准确鉴定ABO血型是输血工作的基础，也是临床安全、有效输血的重要保证，因此，在工作中，我们必须以严谨、认真的态度，严格按照标准操作规程进行操作，在给无偿献血者采血后留样标本定型时，必须做血型正反两次定型，当血型正反定型不符时，送本站质管科再次鉴定或送检至中国科学院输血研究所进行分型确证试验，以确保血型定型准确性，保障临床输血安全。
参考文献：
[1] 赵祥胜，孟庆宝.献血者Am亚型1例报告[J].中国输血杂志，2003，16（1）：41-42
[2] 赵君，方建华，刘玉振等.不规则抗体引起血型正反定型不符原因分析[J].中国误诊学杂志，2002，2（5）：738.
[3] 兰炯采，陈静娴，马红丽，等.推荐ABO疑难血型三步分析法.中国输血杂志，2010，23（3）：165-168.