检测禽β-防御素6夹心ELISA法的建立及应用

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为定量检测禽β-防御素6(avian beta-defensin 6,AvBD6),建立了AvBD6的双抗体夹心ELISA法,并应用于鸡血清中AvBD6浓度的检测.研究结果显示,包被抗体(鼠抗AvBD6 B细胞线性表位的多克隆抗体)、检测抗体(兔抗AvBD6氮端的多克隆抗体)和辣根过氧化酶(HRP)标记羊抗兔IgG的最佳工作稀释倍数分别为2 500、2 000和10 000,AvBD6在20~ 320 ng/mL的线性范围内,标准曲线回归方程为:y=12 024x-2 583,(R2=0.984 2).对不同状态下鸡血清AvBD6浓度检测结果显示:ACTH(25 IU/kgBW)注射1d后,对照组AvBD6浓度高于ACTH组;连续注射ACTH 5 d,对照组AvBD6浓度低于ACTH组,但二者间差异均不显著(P>0.05).大肠杆菌感染后24 h和沙门氏菌感染后3h、24 h,感染组AvBD6浓度均显著地高于对照组(P<0.05),表明AvBD6参与对大肠杆菌和沙门氏菌系统感染的抵抗.
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