HBx-GFP DN突变子长期稳定表达抑制2.2.15细胞乙型肝炎病毒基因的表达

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目的探索和寻找更有效的乙型肝炎治疗新的靶点和新的治疗方法,研究其抗病毒基因表达作用.方法运用基因工程技术,建立了HBx-GFP及其作对照的表达野生X蛋白、绿色荧光蛋白(GFP)的长期稳定表达细胞克隆,Northern blot检测细胞内的乙型肝炎病毒相关基因RNA转录,应用RIA检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg表达,观察对乙型肝炎病毒基因表达的影响.结果所构建的X-GFP突变子,Xwt,GFP质粒均能在2.2.15细胞株中稳定高效表达并使细胞上清液中HBsAg HBeAg表达水平分别较2.2.15组的(101±5.5)ng/ml、(121±8.6)ng/ml显著降低为平均(7.6±11.5)ng/ml、(35±3.5)ng/ml(P<0.01),细胞内的病毒3.5kb,2.1kb及2.4kb的RNA与各对照组比较均有显著降低,以2.1kb及2.4kb的mRNA下降最为显著.结论乙型肝炎X基因DN突变子X-GFP能显著抑制乙型肝炎病毒基因转录和S,C基因的表达.提示,X基因亦是乙型肝炎治疗的一个靶基因.

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