研究LIM激酶1(LIMK1)小干扰RNA(siRNA)敲低后对人胶质瘤细胞系SNB19侵袭迁移能力的影响及机制。
方法(1)免疫组化染色检测对照脑组织及胶质母细胞瘤组织中LIMK1蛋白的表达。(2)将SNB19分为3组：siRNA-LIMK1组(转染siRNA-LIMK1干扰片段)、siRNA-NC组(转染对照siRNA片段)、空白对照组(未转染)。采用实时定量(RT-PCR)法和Western blotting法检测3组细胞中mRNA和蛋白的表达情况。划痕实验和Transwell侵袭实验评价3组细胞的迁移和侵袭能力。免疫荧光法观察3组细胞的定位以及细胞片状伪足形态变化。Western blotting法检测3组细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9以及丝切蛋白(cofilin)、磷酸化cofilin(pcofilin)的表达。
结果(1)免疫组化结果显示蛋白在对照脑组织呈弱阳性表达，而在胶质母细胞瘤中呈强阳性表达。(2)siRNA-LIMK1组细胞mRNA和蛋白较其他2组细胞均明显下降，差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验和Transwell侵袭实验显示3组细胞创面愈合率、侵袭细胞数分别为34.33%±1.53%、75.67%±2.08%、78.33%±1.53％及40.33±5.03、136.67±5.13、143.33±2.52，差异均有统计学意义(F=608.59，P=0.000；F=515.52，P= 0.000)；其中siRNA-LIMK1组创面愈合率、侵袭细胞数较其他2组明显下降，差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光结果显示LIMK1表达于细胞质特别富集于细胞前缘的片状伪足处，siRNA-LIMK1组细胞片状伪足较siRNA-NC组和空白对照组明显变小甚至不伸展。Western blotting结果显示，与siRNA-NC组和空白对照组比较，siRNA-LIMK1组MMP-2、MMP-9以及p-cofilin的表达量均明显下降，差异有统计学意义(P<0.05)；而cofilin的表达量无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)。
结论沉默LIMK1的表达可有效抑制体外胶质瘤细胞系的侵袭和迁移，LIMK1可能成为脑胶质瘤的新的治疗靶点。