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摘要： 目的：在胃癌SGC-7901细胞株及肺癌A549细胞株中探索不同浓度的铂类药物与鸦胆子油乳联用时的抗肿瘤效应。方法：采用MTT法检测不同濃度的鸦胆子油乳注射液、铂类药物单用以及鸦胆子油乳注射液与铂类化疗药联用对胃癌SGC-7901/肺癌A549细胞的体外抑制率。结果：在胃癌SGC-7901细胞株鸦胆子油乳明显降低三个铂类药物（奥沙利铂、顺铂、卡铂）的IC50;鸦胆子油乳与顺铂/卡铂小剂量合用时为协同效应;鸦胆子油乳与奥沙利铂合用大部分均为轻微协同作用。在肺癌A549细胞株中，鸦胆子油乳明显降低两个个铂类药物（顺铂、卡铂）的IC50;鸦胆子油乳与顺铂/卡铂小剂量合用时为协同效应。结论：鸦胆子油乳与铂类药物联用有协同抗肿瘤效应。
关键词： 鸦胆子油乳注射液;铂类化疗药物;胃癌;肺癌
Abstract Objective： To explore the anti-tumor effect of different concentrations of platinum drugs combined with Brucea javanica oil emulsion in gastric cancer SGC-7901 cell line and lung cancer A549 cell line. Methods： MTT method was used to detect the inhibition rate of different concentrations of Brucea javanica oil emulsion injection， platinum drugs alone and combination of Brucea javanica oil emulsion injection and platinum chemotherapy drugs on gastric cancer SGC-7901 / A549 cells in vitro. Results： In gastric cancer SGC-7901 cell line， Brucea javanica oil emulsion significantly reduced the IC50 of three platinum drugs （oxaliplatin， cisplatin， carboplatin）; the combination of Brucea javanica oil emulsion and cisplatin / carboplatin was synergistic effect; most of the combination of Brucea javanica oil emulsion and oxaliplatin was slight synergistic effect. In A549 cell line of lung cancer， Brucea javanica oil emulsion significantly reduced the IC50 of two platinum drugs （cisplatin and carboplatin）， while the combination of Brucea javanica oil emulsion and cisplatin / carboplatin showed synergistic effect. Conclusion：The combination of Brucea javanica oil emulsion and platinum drugs has synergistic antitumor effect.
【中图分类号】R73 【文献标识码】A 【文章编号】2107-2306（2021）05-060-02
鸦胆子为苦木科植物Brucea javanwa（L.）Merr.的成熟果实，鸦胆子油乳是以鸦胆子石油醚提取物为原料，以精制大豆磷脂为乳化剂制成的水包油乳剂[1]。做为目前公认有效的中药抗癌药物之一，药理研究证明鸦胆子油能够抑制DNA拓扑异构酶Ⅱ的活性，抑制癌细胞DNA的活性[2]，临床上多用于肺癌、肺癌脑转移和消化道恶性肿瘤的治疗。该药增强化疗药物疗效的临床观察研究比较多，如一项鸦胆子油乳联合含铂类一线化疗方案治疗非小细胞肺癌的Meta分析表明，鸦胆子油乳能提高非小细胞肺癌患者的化疗效果等[3];有研究报道鸦胆子油乳与顺铂联合应用对人卵巢癌 SKOV3 细胞的抑制作用显著高于这两种药物的单独应用[4];一项研究表明胃癌患者术后在接受替吉奥、奥沙利铂化疗基础上加用鸦胆子油乳注射液可显著提高其中期疗效[5]，均表明鸦胆子油可提高化疗药物的临床疗效;但鸦胆子油乳提高化疗药物疗效的基础研究较少，本课题在胃癌细胞株SGC-7901及肺癌细胞株A549中研究鸦胆子油乳与铂类化疗药物的联合抗肿瘤效应。
1 材料与方法
1.1 主要药物和试剂
鸦胆子油乳注射剂（沈阳药大药业责任有限公司，批号0118062312）;注射用顺铂（江苏豪森药业股份有限公司，批号180801）;注射用卡铂（齐鲁制药有限公司，批号BB2J8019）;奥沙利铂注射液（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号200301AN ）。RPMI-1640 培养基（HyClone公司，批号AE24464298）、胰蛋白酶（HyClone公司，批号J150021）、新生牛血清（浙江天杭生物科技股份有限公司，批号18040502）、CCK-8试剂盒（biosharp公司，批号68096017）。人胃癌细胞株SGC-7901（中科院典型培养物保藏中心细胞库）;人肺癌细胞株A549（中科院典型培养物保藏中心细胞库） 1.2 细胞系
人胃癌细胞株SGC-7901及人肺癌细胞株A549予10%胎牛血清的培养于RPMI 1640培养基，于37℃、5%CO2饱和湿度的恒温培养箱传代培养。取对数生长期细胞进行实验。
1.3 MTT 法检测鸦胆子油乳体外联合给药的作用
取对数生长期细胞，制备成单细胞悬液（ 每1mL 6×104 ～8×104 个细胞） 。细胞接种于96 孔培养板，每孔100μL，常规培养24h后加入100μL以培养液稀释的药物。实验设空白对照、细胞对照、鸦胆子油乳和其他联用药物（顺铂、卡铂、奥沙利铂不同浓度单药及联用实验组），每组设3个平行孔。鸦胆子油乳设5个浓度（1250ug/ml、625ug/ml、313ug/ml、156ug/ml、78ug/ml）[6-7]，三个铂类均按梯度设置相应的5个浓度：顺铂（25ug/ml、13ug/ml、6ug/ml、3ug/ml、2ug/ml）;卡铂（13ug/ml、6ug/ml、3ug/ml、2ug/ml、1ug/ml）;奥沙利铂（50ug/ml、25ug/ml、13ug/ml、6ug/ml、3ug/ml），加药后继续培养48h，MTT法测细胞活力（波长570nm 吸光度，A570），计算抑制率。
1.4 数据处理
细胞实验重复2次以上，以重现性良好为准[5]，联合用药数据采用calcuSyn 软件处理，求出各抑制水平的联合指数（ combination index，CI） ，CI<1 表示联用药物之间有协同作用，CI 值越小协同作用越大; CI=1 表示联用药物之间为相加或无关作用，CI>1表示联用药物之间无协同关系，CI 值越大拮抗作用的可能性越大。化疗药单用及与鸦胆子油乳合用的半数抑制浓度（IC50）之间的比较使用T检验。
2 结果
2.1 在胃癌SGC-7901细胞株及肺癌A549细胞株中分别得出铂类单用及与鸦胆子油乳合用后IC50的变化
2.1.1 胃癌SGC-7901细胞株中鸦胆子油乳明显降低三个铂类药物的IC50
MTT 实验结果显示，在胃癌SGC-7901细胞株中，鸦胆子油乳分别与奥沙利铂、卡铂及顺铂单用及合用时随着药物浓度增加，其抗肿瘤效应也增加。与单用相比，鸦胆子油乳与之合用可以明显降低铂类药物的IC50，鸦胆子油乳降低奥沙利铂的IC50从（9.6780.92）ug/ml至（3.790.06）ug/ml（P<0.05），降低顺铂的IC50从（8.50.4）ug/ml至（1.30.6）ug/ml（P<0.01），降低卡铂的IC50从（7.640.3）ug/ml至（2.340.21）ug/ml（P<0.01）。
2.1.2 肺癌A549细胞株中鸦胆子油乳明显降低两个铂类药物的IC50
MTT 实验结果显示，在肺癌A549细胞株中，鸦胆子油乳分别与卡铂及顺铂单用及合用时随着药物浓度增加，其抗肿瘤效应也增加。与单用相比，鸦胆子油乳与之合用可以明显降低铂类药物的IC50，鸦胆子油乳降低降低顺铂的IC50从（3.00.53）ug/ml至（0.80.05）ug/ml（P<0.01），降低卡铂的IC50从（11.11.6）ug/ml至（1.90.5）ug/ml（P<0.01）。
2.2 鸦胆子油乳与铂类药物合用时，合用效应和合用指数的关系。
根据中效方程式计算出两药合用在不同效应时的合用指数CI，进而判断两药在不同效应各自所需药物浓度之间相互作用是协同、相加还是拮抗。以效应fa为横坐标，CI为纵坐标作量效曲线。通过联合指数（CI）值的数值大小可以定量判断药物间相互作用的强度以及性质（CI>1为拮抗作用，CI=1为相加作用，0.7<CI<1为轻微协同作用，0.3<CI<0.7为协同作用，CI<0.3为强协同作用）[8]。
胃癌SGC-7901细胞株中，鸦胆子油乳与奥沙利铂合用，Fa于CI的关系显示：Fa>89%时两药表现为拮抗作用（CI>1），Fa=89%时（CI=I），两药表现为相加作用;Fa<89%時两药表现为协同作用（CI<I）。鸦胆子油乳与卡铂联合时，Fa与CI的关系显示：Fa>81%时两药表现为拮抗作用（CI>1），Fa=81%时两药为相加作用（CI=1），Fa<81%时为协同作用（CI<I）。鸦胆子油乳与顺铂联合时，Fa与CI的关系显示，Fa>73%时，两药表现为拮抗作用（CI>1），Fa=73%时，两药为相加作用（CI=1），Fa<73%时为协同作用（CI<1）。
肺癌A549细胞株中，鸦胆子油乳与顺铂联合时，Fa与CI的关系显示，Fa>82%时为拮抗作用（CI>1），Fa=82%时，两药为相加作用（CI=1），Fa<82%时为协同作用（CI<1）。鸦胆子油乳与卡铂联合时，Fa与CI的关系显示，Fa>71%时，为拮抗作用（CI>1），Fa=71%时，两药为相加作用（CI=1），Fa<71%时为协同作用（CI<1）。
3 讨论
鸦胆子油乳注射液说明书适应症为肺癌、肺癌脑转移及消化道肿瘤，本研究在肺癌A549细胞株及胃癌SGC-7901细胞株中研究该中药抗癌药与化疗药物的联合抗肿瘤效应。铂类为肺癌的一线化疗药物[9]，临床常用的有顺铂及卡铂;铂类也为胃癌的一线化疗药物[10]，临床常用的有顺铂、卡铂及奥沙利铂;本研究在肺癌A549细胞株中研究鸦胆子油乳分别与顺铂及卡铂的联合抗肿瘤效应，在胃癌SGC-7901细胞株中研究鸦胆子油乳分别与顺铂、卡铂及奥沙利铂的联合抗肿瘤效应。
从两药合用的效应与合用指数关系中可以看出，在SGC-7901细胞株中，鸦胆子油乳与顺铂/卡铂联合使用时，在fa<0.5左右的低抑制效应时，甚至呈现强协同作用，其余状态呈现轻微协同作用或者协同作用;鸦胆子油乳和奥沙利铂联用大部分呈现轻微协同作用。在A549细胞株中，鸦胆子油乳与顺铂在fa<0.7均呈现强协同作用;该药与卡铂在fa<0.7时呈现协同作用。 奥沙利铂注射液说明书中药代动力学部分说明以130mg/m2的剂量连续滴注2小时，其血浆总铂达峰值5.1±0.8ug/mL;一项肿瘤患者静脉滴入卡铂的药代动力学研究得出静滴结束时的平均血药浓度为54.79±11.81ug/mL[11];一项在非小细胞肺癌患者体内药代动力学研究得出顺铂体内血药浓度峰值为0.94±0.25ug/mL[12];一项液相色谱-质谱测定鸦胆子油脂肪乳注射液在癌症患者体内的血药浓度的研究得出鸦胆子油乳静脉注射后体内药物峰浓度为95.20±29.10ug/mL[13]，该4个药在体内药物的浓度均为本实验中的偏低剂量范围，故在体内鸦胆子油乳与三个铂类联用均为协同作用。
鸦胆子油是以鸦胆子为原料提取的脂肪油，其有效成分主要为不饱和脂肪酸类成分[14]。有研究表明不饱和脂肪酸能降低-SH 基含量，促使细胞膜变薄，增加了抗癌药向癌细胞内渗入的机会，增加了化疗药物的浓度，产生杀灭或抑制癌细胞的效果[15]，此可为鸦胆子油乳与铂类有协同抗肿瘤效应的解释之一。
鸦胆子油乳为细胞周期非特异性抗癌药物，对 G0，G， S，G2，M 期癌细胞有杀伤和抑作用，能明显抑制肿瘤DNA的合成[16]。有研究表明鸦胆子油乳在体外能有效抑制SGC-7901 细胞的增殖， 其主要通过阻滞细胞周期于S期来抑制SGC-7901细胞的增殖[17]。而铂类也为细胞周期非特异性抗癌药物，可以协同抑制细胞周期。
鸦胆子油乳可显著抑制肺癌细胞A549增殖，并诱导其凋亡，相关作用机制可能是其可有效抑制肺癌细胞A549中凋亡抑制蛋白Survivin的表达[18]。一项去氢鸦胆子苦素B（鸦胆子油主要成分之一）和顺铂在凋亡相关癌细胞死亡中的相互作用的研究表明：当用去氢鸦胆子苦素B加顺铂处理A549细胞时，观察到对细胞增殖和凋亡的协同作用。 去氢鸦胆子苦素B结合顺铂暴露可增加线粒体膜电位的去极化作用，并从线粒体释放细胞色素c进入细胞质。 联合治疗还增强了Bax的蛋白表达，降低了Bcl-xL和Bcl-2的蛋白水平，并增加了caspase-3，caspase-9 和聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）的裂解。这些结果表明去氢鸦胆子苦素B通过调节线粒体的凋亡途径使A549细胞对顺铂敏感。在A549细胞中发现Nrf2的高组成型表达，这增强了癌细胞对包括顺铂在内的化学治疗剂的抗性。去氢鸦胆子苦素B降低了Nrf2及其靶基因的蛋白质水平，这可能有助于增加细胞内ROS的水平，从而导致线粒体凋亡[19]。该研究证明了鸦胆子油乳和顺铂对A549细胞的细胞毒性和细胞凋亡的协同作用。
本实验得出鸦胆子油乳与铂类在肿瘤患者的应用有协同抗腫瘤效应，其与其他化疗药物的联合抗肿瘤效应还需进一步研究。。
参考文献：
[1] 汪秋红，李金才.鸦胆子油提取制剂及临床应用[J].黑龙江医学，2002，26（ 10） ： 762.
[2] 汤涛，蒙凌，陈陵际.鸦胆子油乳具有多药耐药逆转和拓扑异构酶Ⅱ抑制作用[J].中国药理学通报，2001，17（5）：534-539
[3] 王权，王满才，何曦冉，等.鸦胆子油乳联合含铂类一线化疗方案治疗非小细胞肺癌的Met分析[J].中国中药杂志，2012，37（13）：2022-2029
[4] 赵楠，李玉花，吴效科，等.鸦胆子油乳及联合顺铂对卵巢癌 SKOV3裸鼠移植瘤生长抑制的影响[J].中国中西医结合杂志 ，2015 ，35（1）：57-62
[5] 邹天旭.胃癌术后辅助化疗联合鸦胆子应用效果分析[J].临床医药文献杂志，2017，4（69）：13627
[6]宋萍，章燕君，何萍.鸦胆子油乳注射液的临床药物利用研究[J].中国医药指南，2013，11（ 27）：268-270
课题：成都市医学科研课题，课题编号：2020071，成都市医学科研课题，课题编号：2018047
关键词： 鸦胆子油乳注射液;铂类化疗药物;胃癌;肺癌
Abstract Objective： To explore the anti-tumor effect of different concentrations of platinum drugs combined with Brucea javanica oil emulsion in gastric cancer SGC-7901 cell line and lung cancer A549 cell line. Methods： MTT method was used to detect the inhibition rate of different concentrations of Brucea javanica oil emulsion injection， platinum drugs alone and combination of Brucea javanica oil emulsion injection and platinum chemotherapy drugs on gastric cancer SGC-7901 / A549 cells in vitro. Results： In gastric cancer SGC-7901 cell line， Brucea javanica oil emulsion significantly reduced the IC50 of three platinum drugs （oxaliplatin， cisplatin， carboplatin）; the combination of Brucea javanica oil emulsion and cisplatin / carboplatin was synergistic effect; most of the combination of Brucea javanica oil emulsion and oxaliplatin was slight synergistic effect. In A549 cell line of lung cancer， Brucea javanica oil emulsion significantly reduced the IC50 of two platinum drugs （cisplatin and carboplatin）， while the combination of Brucea javanica oil emulsion and cisplatin / carboplatin showed synergistic effect. Conclusion：The combination of Brucea javanica oil emulsion and platinum drugs has synergistic antitumor effect.
【中图分类号】R73 【文献标识码】A 【文章编号】2107-2306（2021）05-060-02
鸦胆子为苦木科植物Brucea javanwa（L.）Merr.的成熟果实，鸦胆子油乳是以鸦胆子石油醚提取物为原料，以精制大豆磷脂为乳化剂制成的水包油乳剂[1]。做为目前公认有效的中药抗癌药物之一，药理研究证明鸦胆子油能够抑制DNA拓扑异构酶Ⅱ的活性，抑制癌细胞DNA的活性[2]，临床上多用于肺癌、肺癌脑转移和消化道恶性肿瘤的治疗。该药增强化疗药物疗效的临床观察研究比较多，如一项鸦胆子油乳联合含铂类一线化疗方案治疗非小细胞肺癌的Meta分析表明，鸦胆子油乳能提高非小细胞肺癌患者的化疗效果等[3];有研究报道鸦胆子油乳与顺铂联合应用对人卵巢癌 SKOV3 细胞的抑制作用显著高于这两种药物的单独应用[4];一项研究表明胃癌患者术后在接受替吉奥、奥沙利铂化疗基础上加用鸦胆子油乳注射液可显著提高其中期疗效[5]，均表明鸦胆子油可提高化疗药物的临床疗效;但鸦胆子油乳提高化疗药物疗效的基础研究较少，本课题在胃癌细胞株SGC-7901及肺癌细胞株A549中研究鸦胆子油乳与铂类化疗药物的联合抗肿瘤效应。
1 材料与方法
1.1 主要药物和试剂
鸦胆子油乳注射剂（沈阳药大药业责任有限公司，批号0118062312）;注射用顺铂（江苏豪森药业股份有限公司，批号180801）;注射用卡铂（齐鲁制药有限公司，批号BB2J8019）;奥沙利铂注射液（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号200301AN ）。RPMI-1640 培养基（HyClone公司，批号AE24464298）、胰蛋白酶（HyClone公司，批号J150021）、新生牛血清（浙江天杭生物科技股份有限公司，批号18040502）、CCK-8试剂盒（biosharp公司，批号68096017）。人胃癌细胞株SGC-7901（中科院典型培养物保藏中心细胞库）;人肺癌细胞株A549（中科院典型培养物保藏中心细胞库） 1.2 细胞系
人胃癌细胞株SGC-7901及人肺癌细胞株A549予10%胎牛血清的培养于RPMI 1640培养基，于37℃、5%CO2饱和湿度的恒温培养箱传代培养。取对数生长期细胞进行实验。
1.3 MTT 法检测鸦胆子油乳体外联合给药的作用
取对数生长期细胞，制备成单细胞悬液（ 每1mL 6×104 ～8×104 个细胞） 。细胞接种于96 孔培养板，每孔100μL，常规培养24h后加入100μL以培养液稀释的药物。实验设空白对照、细胞对照、鸦胆子油乳和其他联用药物（顺铂、卡铂、奥沙利铂不同浓度单药及联用实验组），每组设3个平行孔。鸦胆子油乳设5个浓度（1250ug/ml、625ug/ml、313ug/ml、156ug/ml、78ug/ml）[6-7]，三个铂类均按梯度设置相应的5个浓度：顺铂（25ug/ml、13ug/ml、6ug/ml、3ug/ml、2ug/ml）;卡铂（13ug/ml、6ug/ml、3ug/ml、2ug/ml、1ug/ml）;奥沙利铂（50ug/ml、25ug/ml、13ug/ml、6ug/ml、3ug/ml），加药后继续培养48h，MTT法测细胞活力（波长570nm 吸光度，A570），计算抑制率。
1.4 数据处理
细胞实验重复2次以上，以重现性良好为准[5]，联合用药数据采用calcuSyn 软件处理，求出各抑制水平的联合指数（ combination index，CI） ，CI<1 表示联用药物之间有协同作用，CI 值越小协同作用越大; CI=1 表示联用药物之间为相加或无关作用，CI>1表示联用药物之间无协同关系，CI 值越大拮抗作用的可能性越大。化疗药单用及与鸦胆子油乳合用的半数抑制浓度（IC50）之间的比较使用T检验。
2 结果
2.1 在胃癌SGC-7901细胞株及肺癌A549细胞株中分别得出铂类单用及与鸦胆子油乳合用后IC50的变化
2.1.1 胃癌SGC-7901细胞株中鸦胆子油乳明显降低三个铂类药物的IC50
MTT 实验结果显示，在胃癌SGC-7901细胞株中，鸦胆子油乳分别与奥沙利铂、卡铂及顺铂单用及合用时随着药物浓度增加，其抗肿瘤效应也增加。与单用相比，鸦胆子油乳与之合用可以明显降低铂类药物的IC50，鸦胆子油乳降低奥沙利铂的IC50从（9.6780.92）ug/ml至（3.790.06）ug/ml（P<0.05），降低顺铂的IC50从（8.50.4）ug/ml至（1.30.6）ug/ml（P<0.01），降低卡铂的IC50从（7.640.3）ug/ml至（2.340.21）ug/ml（P<0.01）。
2.1.2 肺癌A549细胞株中鸦胆子油乳明显降低两个铂类药物的IC50
MTT 实验结果显示，在肺癌A549细胞株中，鸦胆子油乳分别与卡铂及顺铂单用及合用时随着药物浓度增加，其抗肿瘤效应也增加。与单用相比，鸦胆子油乳与之合用可以明显降低铂类药物的IC50，鸦胆子油乳降低降低顺铂的IC50从（3.00.53）ug/ml至（0.80.05）ug/ml（P<0.01），降低卡铂的IC50从（11.11.6）ug/ml至（1.90.5）ug/ml（P<0.01）。
2.2 鸦胆子油乳与铂类药物合用时，合用效应和合用指数的关系。
根据中效方程式计算出两药合用在不同效应时的合用指数CI，进而判断两药在不同效应各自所需药物浓度之间相互作用是协同、相加还是拮抗。以效应fa为横坐标，CI为纵坐标作量效曲线。通过联合指数（CI）值的数值大小可以定量判断药物间相互作用的强度以及性质（CI>1为拮抗作用，CI=1为相加作用，0.7<CI<1为轻微协同作用，0.3<CI<0.7为协同作用，CI<0.3为强协同作用）[8]。
胃癌SGC-7901细胞株中，鸦胆子油乳与奥沙利铂合用，Fa于CI的关系显示：Fa>89%时两药表现为拮抗作用（CI>1），Fa=89%时（CI=I），两药表现为相加作用;Fa<89%時两药表现为协同作用（CI<I）。鸦胆子油乳与卡铂联合时，Fa与CI的关系显示：Fa>81%时两药表现为拮抗作用（CI>1），Fa=81%时两药为相加作用（CI=1），Fa<81%时为协同作用（CI<I）。鸦胆子油乳与顺铂联合时，Fa与CI的关系显示，Fa>73%时，两药表现为拮抗作用（CI>1），Fa=73%时，两药为相加作用（CI=1），Fa<73%时为协同作用（CI<1）。
肺癌A549细胞株中，鸦胆子油乳与顺铂联合时，Fa与CI的关系显示，Fa>82%时为拮抗作用（CI>1），Fa=82%时，两药为相加作用（CI=1），Fa<82%时为协同作用（CI<1）。鸦胆子油乳与卡铂联合时，Fa与CI的关系显示，Fa>71%时，为拮抗作用（CI>1），Fa=71%时，两药为相加作用（CI=1），Fa<71%时为协同作用（CI<1）。
3 讨论
鸦胆子油乳注射液说明书适应症为肺癌、肺癌脑转移及消化道肿瘤，本研究在肺癌A549细胞株及胃癌SGC-7901细胞株中研究该中药抗癌药与化疗药物的联合抗肿瘤效应。铂类为肺癌的一线化疗药物[9]，临床常用的有顺铂及卡铂;铂类也为胃癌的一线化疗药物[10]，临床常用的有顺铂、卡铂及奥沙利铂;本研究在肺癌A549细胞株中研究鸦胆子油乳分别与顺铂及卡铂的联合抗肿瘤效应，在胃癌SGC-7901细胞株中研究鸦胆子油乳分别与顺铂、卡铂及奥沙利铂的联合抗肿瘤效应。
从两药合用的效应与合用指数关系中可以看出，在SGC-7901细胞株中，鸦胆子油乳与顺铂/卡铂联合使用时，在fa<0.5左右的低抑制效应时，甚至呈现强协同作用，其余状态呈现轻微协同作用或者协同作用;鸦胆子油乳和奥沙利铂联用大部分呈现轻微协同作用。在A549细胞株中，鸦胆子油乳与顺铂在fa<0.7均呈现强协同作用;该药与卡铂在fa<0.7时呈现协同作用。 奥沙利铂注射液说明书中药代动力学部分说明以130mg/m2的剂量连续滴注2小时，其血浆总铂达峰值5.1±0.8ug/mL;一项肿瘤患者静脉滴入卡铂的药代动力学研究得出静滴结束时的平均血药浓度为54.79±11.81ug/mL[11];一项在非小细胞肺癌患者体内药代动力学研究得出顺铂体内血药浓度峰值为0.94±0.25ug/mL[12];一项液相色谱-质谱测定鸦胆子油脂肪乳注射液在癌症患者体内的血药浓度的研究得出鸦胆子油乳静脉注射后体内药物峰浓度为95.20±29.10ug/mL[13]，该4个药在体内药物的浓度均为本实验中的偏低剂量范围，故在体内鸦胆子油乳与三个铂类联用均为协同作用。
鸦胆子油是以鸦胆子为原料提取的脂肪油，其有效成分主要为不饱和脂肪酸类成分[14]。有研究表明不饱和脂肪酸能降低-SH 基含量，促使细胞膜变薄，增加了抗癌药向癌细胞内渗入的机会，增加了化疗药物的浓度，产生杀灭或抑制癌细胞的效果[15]，此可为鸦胆子油乳与铂类有协同抗肿瘤效应的解释之一。
鸦胆子油乳为细胞周期非特异性抗癌药物，对 G0，G， S，G2，M 期癌细胞有杀伤和抑作用，能明显抑制肿瘤DNA的合成[16]。有研究表明鸦胆子油乳在体外能有效抑制SGC-7901 细胞的增殖， 其主要通过阻滞细胞周期于S期来抑制SGC-7901细胞的增殖[17]。而铂类也为细胞周期非特异性抗癌药物，可以协同抑制细胞周期。
鸦胆子油乳可显著抑制肺癌细胞A549增殖，并诱导其凋亡，相关作用机制可能是其可有效抑制肺癌细胞A549中凋亡抑制蛋白Survivin的表达[18]。一项去氢鸦胆子苦素B（鸦胆子油主要成分之一）和顺铂在凋亡相关癌细胞死亡中的相互作用的研究表明：当用去氢鸦胆子苦素B加顺铂处理A549细胞时，观察到对细胞增殖和凋亡的协同作用。 去氢鸦胆子苦素B结合顺铂暴露可增加线粒体膜电位的去极化作用，并从线粒体释放细胞色素c进入细胞质。 联合治疗还增强了Bax的蛋白表达，降低了Bcl-xL和Bcl-2的蛋白水平，并增加了caspase-3，caspase-9 和聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）的裂解。这些结果表明去氢鸦胆子苦素B通过调节线粒体的凋亡途径使A549细胞对顺铂敏感。在A549细胞中发现Nrf2的高组成型表达，这增强了癌细胞对包括顺铂在内的化学治疗剂的抗性。去氢鸦胆子苦素B降低了Nrf2及其靶基因的蛋白质水平，这可能有助于增加细胞内ROS的水平，从而导致线粒体凋亡[19]。该研究证明了鸦胆子油乳和顺铂对A549细胞的细胞毒性和细胞凋亡的协同作用。
本实验得出鸦胆子油乳与铂类在肿瘤患者的应用有协同抗腫瘤效应，其与其他化疗药物的联合抗肿瘤效应还需进一步研究。。
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课题：成都市医学科研课题，课题编号：2020071，成都市医学科研课题，课题编号：2018047