方穗山羊草Rubisco活性及小亚基基因克隆和功能分析

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以方穗山羊草(Aegilops squarrosa L.)为母本,普通小麦(Triticum aestivum L.)为父本杂交,并以普通小麦为父本回交10代获得的核质杂种小麦为实验材料,测定了父母本及其核质杂种小麦rubisco的羧化活性和加氧活性。同时以方穗山羊草幼苗叶片为材料构建了库容量为5.5×10~5pfu的λgt10cDNA文库,并以水稻rbcS部分片段为探针筛选该cDNA文库,获得了方穗山羊草rbcS的cDNA克隆pRAS-1。核苷酸序列分析表明该cDNA全长815bp。比较以上三种材料中Rubisco活性和小亚基氨基酸的差异,推测小亚基上第56、84、98和117位氨基酸残基可能对酶的功能起着重要的作用。 Aegilops squarrosa L. was used as the female parent and Triticum aestivum L. as the male parent, and the reciprocal crossbred wheat of 10 generations was used as the male parent for the experiment. The parental and its nuclear hybrid wheat rubisco carboxylation activity and oxygenation activity. Meanwhile, the λgt10 cDNA library with a volume of 5.5 × 10 ~ 5pfu was constructed from leaves of Aegiceras corniculatum, and the cDNA library was screened by partial screening of rice rbcS fragment. The cDNA clone of rbcS was obtained from pSAS- 1. Nucleotide sequence analysis showed that the cDNA was 815bp in length. Comparing the difference of Rubisco activity and small subunit amino acids in the above three materials, it is speculated that the small subunits 56, 84, 98 and 117 amino acid residues may play an important role in the function of the enzyme.
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