【摘 要】
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目的 建立检测人呼吸道合胞病毒(human Respiratory Syncytial Virus,hRSV)实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)绝对定量检测法. 方法 提取人呼吸道合胞病
【机 构】
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贵州医科大学基础医学院,现代病原生物学特色重点实验室,寄生虫学教研室,贵州贵阳550025;贵州医科大学附属医院急诊科,贵州贵阳550004;贵州医科大学,贵州贵阳550025;贵州医科大学药学院,贵
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目的 建立检测人呼吸道合胞病毒(human Respiratory Syncytial Virus,hRSV)实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)绝对定量检测法. 方法 提取人呼吸道合胞病毒mRNA并逆转录为cDNA,以cDNA为模板,用hRSV的N基因作为目的基因设计的引物进行PCR扩增,扩增产物连接到pMDTM 18-T载体,构建标准检测质粒.以构建的标准检测质粒进行qRT-PCR,建立绝对定量检测的标准曲线. 结果 PCR扩增获得714 bp产物,与pMDTM 18-T载体连接构建的标准检测质粒测序验证成功.qRT-PCR检测目的基因扩增效率E为105.2％,R2=0.998,在1.0×102～1.0×108拷贝范围内具良好线性关系,最低检测限为100拷贝/反应. 结论 成功建立了hRSVqRT-PCR绝对定量检测法,该方法快速、特异、灵敏,为hRSV诊断试剂盒的研制奠定了基础.
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