【摘 要】
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目的 探讨人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)基因修饰的人脂肪源性间充质干细胞(ADSCs)的成骨能力及基因转染对ADSCs成骨分化的生物学调控.方法 流式细胞技术鉴定从人脂肪组织中提
【机 构】
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上海交通大学医学院附属第九人民医院骨科,Orthopedic Research Unit
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目的 探讨人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)基因修饰的人脂肪源性间充质干细胞(ADSCs)的成骨能力及基因转染对ADSCs成骨分化的生物学调控.方法 流式细胞技术鉴定从人脂肪组织中提取的细胞为间充质来源的干细胞.将ADSCs转染hBMP-2基因,免疫沉淀+Western blotting法和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测hBMP-2表达,确定hBMP-2表达量及表达稳定性,碱性磷酸酶(ALP)染色、ALP定量测定、钙结节染色及RT-PCR分析hBMP-2基因转染对ADSCs向成骨细胞转化的调控,并将转基因细胞注入裸鼠股部肌内,通过X线及组织学检查观察体内成骨情况.结果 流式细胞术证实从脂肪中提取的细胞为间充质来源的干细胞.转基因后免疫沉淀+Western blotting法和ELISA法显示转染hBMP-2的ADSCs具有较高且稳定的hBMP-2的表达,转染21 d后表达量无明显降低.ALP染色、ALP定量测定、钙结节染色及RT-PCR发现转基因ADSCs向成骨细胞方向发生分化.裸鼠肌内注射转基因细胞后2周即显示有异位骨形成,4周明显增多,对照组无骨组织形成.结论 转染hBMP-2基因的ADSCs在持续稳定高表达目的蛋白的同时,自身向成骨细胞发生分化,并在裸鼠体内形成异位骨.因此,ADSCs有望作为新的基因工程种子细胞.
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