脐血CD34+细胞体外扩增前后生物学特征及 HOXB4基因表达变化的研究

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目的比较脐血 CD34+细胞体外扩增前后生物学特征及 HOXB4基因表达的变化。方法分离新鲜人脐血单个核细胞(MNC),应用免疫磁珠分选系统(MiniMACS)分选CD34+细胞,在含细胞因子组合FL+SCF+TPO+IL-3的IMDM+10%FBS培养基中体外培养2周,分别于培养第0、7、14天计数有核细胞( nucleated cells ,NC)数,流式细胞仪分析CD34+细胞比例,RT-PCR检测HOXB4基因的表达变化。并取第0天与第7天的细胞于甲基纤维素半固体培养基中培养14 d,光镜下计数造血干/祖细胞集落形成数目。结果经MiniMACS分选,CD34+细胞比例由分选前的(1.1±0.25)%升至(83.17±8.67)%,CD34+细胞回收率为(72.90±8.75)%。体外培养第7天与第14天CD34+细胞的比例分别降至(4.8±0.64)%与(0.6±0.27)%(P<0.05);NC和CD34+细胞均有不同程度的增加,扩增7 d与14 d的NC数、CD34+细胞数分别较第0天扩增(76.2±14.9)倍、(254.0±48.85)倍与(3.9±0.69)倍、(1.8±0.64)倍,不同时间点差异有统计学意义( P<0.05)。经过14 d半固体培养,扩增7 d的造血干/祖细胞集落形成数目是未扩增的3.75倍( P<0.05)。 RT-PCR检测HOXB4基因在第0天的CD34+细胞中高表达,但其表达量随着体外培养时间的延长而下降( P<0.05)。结论细胞因子组合FL+SCF+TPO+IL-3可有效扩增造血干/祖细胞,培养第7天较第14天的CD34+细胞扩增倍数高,但CD34+细胞表型在体外培养过程中迅速下降,与CD34+细胞自我更新能力相关的HOXB4基因的表达水平也随体外培养时间的延长而下降。
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