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报道了将单体胰岛素前体（MIP）经胰蛋白酶和羧肽酶B两步连续酶切获得B链C端去四肽胰岛素（DTI）的方法。MIP由甲醇酵母表达，最高发酵表达量达到150mg／L。发酵液中MIP通过疏水层析，分子筛初步纯化后直接进行酶切，在胰蛋白酶酶切3h后加入抑制剂Paminobenzamidine处理15min，然后直接加入羧肽酶B酶切6h，再通过反相柱纯化即可得到纯品DTI，从分子筛到最后DTI，总纯化得率达到77％。按中国药典小白鼠惊厥法测定得DTI的生物活力为22IU／mg，是胰岛素的80％，在Superdex