【摘 要】
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目的 基于噬菌体抗体库技术制备抗诺如病毒（norovirus,NoV）全人源单链抗体（single-chain antibody fragment,scFv）。方法 从GⅡ. 6 NoV感染者恢复期外周血中分离得到外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs），提取总RNA,RT-PCR法分别扩增scFv的重链和轻链可变区基因片段，通过Overl
【机 构】
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南方医科大学公共卫生学院流行病学系
【基金项目】
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国家自然科学基金（317710017）； 广东省自然科学基金（2019A1515010951）； 广东省重点领域研发计划资助（2022B1111020002）；
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目的 基于噬菌体抗体库技术制备抗诺如病毒（norovirus,NoV）全人源单链抗体（single-chain antibody fragment,scFv）。方法 从GⅡ. 6 NoV感染者恢复期外周血中分离得到外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs），提取总RNA,RT-PCR法分别扩增scFv的重链和轻链可变区基因片段，通过Overlap PCR技术将两者随机拼接成scFv基因片段。将scFv基因克隆至噬菌体质粒pCANTAB-5E，转化至感受态E. coli TG1，获得全人源scFv噬菌体抗体库。以GⅡ. 6 P蛋白为固相抗原对抗体库进行4轮生物筛选，以选取的特异性抗NoV阳性噬菌体为模板，扩增scFv基因后，进行原核表达及纯化，并鉴定其特异性及中和性。结果 人源噬菌体scFv抗体库库容约为8.8×10~6PFU/mL。4轮生物筛选共获得10株scFv，均能与GⅡ. 4、GⅡ. 6和GⅡ. 17 NoV P蛋白发生特异性结合，且对3株NoV毒株均有不同程度的阻断作用。结论 利用GⅡ. 6 NoV感染者恢复期的PBMCs构建了全人源scFv噬菌体抗体库，筛选出的10株抗NoV scFv对NoV具有一定的中和作用。
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