【摘 要】
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为了获得纯度较高的哈萨克羊胎盘原代滋养层细胞，采用组织块培养法、胰酶消化法和胰酶+组织块法分离原代滋养层细胞，通过胰酶差时消化法对细胞进行纯化，显微镜下观察滋养层细胞的形态学特点和生长特性，利用免疫细胞化学染色法对滋养层细胞的特异性表达角蛋白7（cytokeratin 7,CK7）进行鉴定，通过RT-PCR对滋养层细胞标志基因干扰素-τ（IFN-τ）进行检测，同时使用孕酮（P4）、雌二醇（E2）或
【基金项目】
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国家自然科学基金（32060751）； 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室开放课题（MYSKLKF201905）；
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为了获得纯度较高的哈萨克羊胎盘原代滋养层细胞，采用组织块培养法、胰酶消化法和胰酶+组织块法分离原代滋养层细胞，通过胰酶差时消化法对细胞进行纯化，显微镜下观察滋养层细胞的形态学特点和生长特性，利用免疫细胞化学染色法对滋养层细胞的特异性表达角蛋白7（cytokeratin 7,CK7）进行鉴定，通过RT-PCR对滋养层细胞标志基因干扰素-τ（IFN-τ）进行检测，同时使用孕酮（P4）、雌二醇（E2）或P4、E2和IFN-τ处理滋养层细胞，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测胚胎附植相关基因的转录水平。结果显示，与其他方法相比，利用胰酶+组织块法细胞生长周期较短，第2天有细胞从组织块中迁出，5～6 d细胞呈单层铺开，细胞均呈上皮样生长。免疫细胞化学染色显示，细胞CK7染色阳性结果大于95%。RT-PCR检测到分离的滋养层细胞可正常表达IFN-τ。此外，通过P4、E2和IFN-τ处理后，胚胎附植相关基因ISG15、CXCL10、RSAD2、CTSL、SPP1和MUC1在滋养层细胞中的表达水平显著上调。本研究通过胰酶+组织块培养法结合胰酶差时消化法成功分离和纯化哈萨克羊胎盘原代滋养层细胞，为哈萨克羊胚胎附植相关调控机制的研究奠定了基础。
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