【摘 要】
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目的 构建微小脲原体UP3-00750基因的原核表达载体，对其编码的蛋白进行表达并进行生物信息学分析。方法 利用Primer Premier 5.0软件设计引物，利用PCR方法扩增UP3-00750基因，经限制性内切酶双酶切后与同酶消化的pGEX-6p2于16℃在T4连接酶作用下连接16 h,连接产物转入大肠埃希菌XL1-Blue中，IPTG诱导GST-UP3-00750融合蛋白的表达，并采用相关
【机 构】
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河北北方学院临床检验诊断学重点实验室
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目的 构建微小脲原体UP3-00750基因的原核表达载体，对其编码的蛋白进行表达并进行生物信息学分析。方法 利用Primer Premier 5.0软件设计引物，利用PCR方法扩增UP3-00750基因，经限制性内切酶双酶切后与同酶消化的pGEX-6p2于16℃在T4连接酶作用下连接16 h,连接产物转入大肠埃希菌XL1-Blue中，IPTG诱导GST-UP3-00750融合蛋白的表达，并采用相关生物信息学软件对其进行分析。结果 对构建的pGEX-6p2-UP3-00750重组质粒测序，所得序列与NCBI中序列比对，与U.parvum strain hebnu uu3序列的同源性为100%。诱导的融合蛋白经SDS-PAGE分析显示其分子质量与GST-UP3-00750融合蛋白的预期大小一致。生物信息学分析该假设蛋白由159个氨基酸组成，分子式为C860H1369N223O254S2,理论等电点（pI）为6.43,不稳定指数为36.70,脂肪族指数为112.14;其二级结构中α-螺旋（Hh）占39.62%,β-折叠（Ee）占19.50%,无规则卷曲（Cc）占40.88%,无β-转角；属于无信号肽的跨膜蛋白；蛋白质互作提示该基因编码的蛋白与atpA-1、atpD-1、UU044、UU045、UU046、UU047、UU048、UU049、UU050、UU052相关联。结论 成功构建了GST-UP3-00750原核表达载体，在大肠埃希菌中表达GST融合蛋白。该蛋白为无信号肽的跨膜蛋白，可能参与ATP合成代谢途径。
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