【摘 要】
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目的 考察DNA序列对利用MphR(A)蛋白和启动子mph(A)序列的结合-解离特性构建的大环内酯类抗生素的体外类酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测系统性能的影响.方法 通过MphR(A)蛋白与3段野生型DNA序列及其他突变序列构建类ELISA检测系统,先通过添加和不添加红霉素作用,获得各DNA所得的最大和最小OD450,以最大与最小OD450值相差较大、最小OD450值接近0作为表现较好的标准,再对表现较好的系统计算红霉素反应的半数抑制
【机 构】
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贵阳学院食品与制药工程学院, 贵阳 550005;中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所, 北京 100085
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目的 考察DNA序列对利用MphR(A)蛋白和启动子mph(A)序列的结合-解离特性构建的大环内酯类抗生素的体外类酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测系统性能的影响.方法 通过MphR(A)蛋白与3段野生型DNA序列及其他突变序列构建类ELISA检测系统,先通过添加和不添加红霉素作用,获得各DNA所得的最大和最小OD450,以最大与最小OD450值相差较大、最小OD450值接近0作为表现较好的标准,再对表现较好的系统计算红霉素反应的半数抑制浓度(median inhibitory concentration,IC50)值.结果 MphR(A)蛋白可以和不同DNA序列结合,从而获得不同的检测性能.采用突变序列AC4-DNA建立的类ELISA系统IC50值为(2.33±0.70)ng/mL,低于野生型DNA所得的IC50[(3.95±1.18)ng/mL],系统灵敏度提升.结论 通过DNA调控该类ELISA系统是一种可行的手段.此外,在野生型A-DNA、B-DNA、C-DNA均发现一段22 bp伪回文结构,该伪回文结构符合Tet蛋白家族的DNA序列特征,认为是该伪回文结构是与蛋白结合的核心序列.
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